重组人MARCHF1蛋白:常见问题与核心参数
重组人MARCHF1蛋白:常见问题与核心参数
Recombinant Human MARCHF1 Protein是膜相关RING-CH E3泛素连接酶1的研究级重组蛋白,用于研究免疫抗原提呈、MHC II类分子调控及人类细胞中泛素介导的蛋白转运过程。
- 产品名称
- 重组人MARCHF1蛋白
- 货号
- rp371058
- 蛋白家族
- MARCH(膜相关RING-CH)E3泛素连接酶家族
- 主要功能
- 在抗原提呈细胞上对MHC II类分子及CD86进行泛素化修饰并下调其表达
- 研究应用
- 免疫调节研究、抗原提呈实验、泛素通路研究、蛋白相互作用研究
- 物种来源
- 人源(智人)
MARCHF1是什么?其科学意义何在?
MARCHF1(膜相关RING-CH蛋白1),又称MARCH1,是属于MARCH家族跨膜RING结构域蛋白的E3泛素连接酶。它主要在免疫细胞(包括树突状细胞和B淋巴细胞)中表达,在调控适应性免疫应答中发挥核心作用。
MARCHF1的主要作用机制是对关键免疫表面分子(如MHC II类分子及共刺激分子CD86)进行泛素化修饰。通过为这些受体打上泛素标签,MARCHF1触发其内化和溶酶体降解,从而精细调控向辅助性T细胞提呈抗原的程度与持续时间。这一调控轴对于防止过度免疫激活、维持外周免疫耐受至关重要。
MARCHF1活性失调与炎症性疾病、感染生物学中免疫应答改变及肿瘤免疫逃逸等密切相关,使其成为免疫学与转化医学领域颇具价值的研究靶点。
MARCHF1的主要生化与结构特征是什么?
MARCHF1是一种多次跨膜蛋白,其特征是具有位于胞质侧N端的RING-CH(含C4HC3基序的RING指结构域)结构域,负责其E3泛素连接酶的催化活性。该RING-CH结构域负责将泛素从E2泛素结合酶转移至底物赖氨酸残基。
该蛋白含有两个跨膜结构域,将其锚定于胞内囊泡膜上,尤其是内体和反式高尔基体网络区室。MARCHF1通过这些胞内区室与其底物MHC II类分子(特别是HLA-DR β链的胞质尾部)和CD86相互作用,介导其单泛素化。
作为重组产品,根据生产策略的不同,所表达的结构域可能聚焦于可溶性、胞外或催化区域。研究人员应查阅货号rp371058的具体产品说明书,以获取确切的表达区域、分子量、标签信息及纯度规格。
重组人MARCHF1蛋白应如何储存和处理?
重组蛋白的正确储存与处理对于维持其活性和确保实验结果的重复性至关重要。以下为此类重组蛋白的通用最佳操作指南:
- 短期储存(不超过1个月):在提供的缓冲液中于4 °C保存。
- 长期储存:分装以避免反复冻融,于−20 °C或−80 °C保存。反复冻融会显著降低蛋白活性和结构完整性。
- 载体蛋白:若在低浓度下储存,建议添加0.1–0.2% BSA等载体蛋白,以防止吸附损失。
- 避免:长时间暴露于室温、反复冻融及去污剂污染。
注意:请务必参考货号rp371058的具体质量检验证书(CoA)和产品说明书中的配方特定储存说明,因条件可能因批次和表达构建体而异。
重组人MARCHF1蛋白适用于哪些研究应用?
重组人MARCHF1蛋白(rp371058)供体外研究使用,适用于免疫学、细胞生物学和生物化学领域的多种实验应用:
- 泛素化实验:作为E3连接酶组分用于无细胞泛素化反应体系,研究底物特异性和催化机制。
- 蛋白-蛋白相互作用研究:通过Pull-down、共免疫沉淀或表面等离子体共振等方法,研究MARCHF1与E2泛素结合酶及MHC II类分子、CD86等免疫学底物的结合伴侣。
- 结构研究:可作为抗体制备的抗原,或作为Western blot和ELISA实验的参考标准品。
- 药物发现:作为工具蛋白,用于筛选靶向MARCHF1介导的免疫调控通路的小分子抑制剂或调节剂。
- 功能回补实验:在基于细胞的系统中用于在基因敲除或敲低模型中恢复MARCHF1活性。
本产品仅供研究使用,不适用于治疗、诊断或临床用途。
重组人MARCHF1蛋白的质量、纯度与验证
阿拉丁科学对重组蛋白实施质量控制程序,以确保其在研究应用中的一致性和可靠性。对于重组人MARCHF1蛋白(rp371058),研究人员可期待以下质控保证:
- 纯度评估:通常通过SDS-PAGE和/或HPLC进行评估,以确认表达蛋白条带并评估纯度水平。具体纯度值载于批次特定的质量检验证书(CoA)中。
- 身份确认:蛋白质身份通常通过质谱法或N端测序加以确认。
- 内毒素检测:采用鲎试剂(LAL)法检测内毒素水平;可接受阈值在CoA中注明,对基于细胞的实验和免疫学实验尤为关键。
- 生物活性:在适用情况下,可通过与E3连接酶活性相关的体外功能实验验证活性。
订购时请务必索取批次特定的CoA,以验证该批次是否符合您实验所需的规格要求。如需了解货号rp371058的更多信息,请联系阿拉丁科学技术支持团队。
常见问题
重组人MARCHF1蛋白是什么?其功能是什么?
重组人MARCHF1蛋白是MARCH1(膜相关RING-CH蛋白1)的实验室制备形式,是一种在树突状细胞和B细胞等免疫细胞中表达的E3泛素连接酶。其主要功能是对MHC II类分子和CD86进行泛素化修饰,促进其内化和降解,从而调控抗原提呈和适应性免疫应答。
重组人MARCHF1蛋白(rp371058)使用何种表达系统生产?
货号rp371058所用具体表达系统详见产品说明书和质量检验证书。重组人蛋白常用的表达系统包括大肠杆菌、杆状病毒-昆虫细胞、哺乳动物细胞和酵母系统,各系统对糖基化、折叠和活性有不同影响。请联系阿拉丁科学或参阅产品页面,获取该货号确认的表达宿主详情。
重组人MARCHF1蛋白是否适用于基于细胞的泛素化实验?
是的,重组人MARCHF1蛋白适用于体外研究,包括无细胞和基于细胞的泛素化实验,可用于研究MARCHF1对MHC II类分子等底物的E3连接酶活性。研究人员应使用适当的阳性对照验证蛋白活性,并确保内毒素水平符合其特定细胞实验体系的要求。
在使用重组人MARCHF1蛋白时,如何避免活性损失?
为保护蛋白活性,操作过程中始终将蛋白置于冰上,首次解冻时分装为单次用量以避免反复冻融,并在低吸附离心管中操作以减少吸附损失。长期储存请在原配方缓冲液中于−80 °C保存。若稀释至低浓度,建议添加0.1% BSA等载体蛋白。
重组人MARCHF1蛋白经过哪些质量控制检测?
重组人MARCHF1蛋白经过标准质量控制程序,包括SDS-PAGE纯度评估、质谱法或测序确认蛋白身份,以及LAL法内毒素检测。批次特定结果记录于随货提供的质量检验证书(CoA)中。如需了解活性检测详情,请联系阿拉丁科学技术支持团队。
参考文献
- Bartee E, Mansouri M, Hovey Nerenberg BT, Gouveia K, Früh K. Downregulation of major histocompatibility complex class I by human ubiquitin ligases related to viral immune evasion proteins. J Virol. 2004;78(3):1109-1120. doi:10.1128/JVI.78.3.1109-1120.2004
- Shin JS, Ebersold M, Pypaert M, Delamarre L, Hartley A, Bhattacharyya R, Bhattacharyya S, Mellman I. Surface expression of MHC class II in dendritic cells is controlled by regulated ubiquitination. Nature. 2006;444(7115):115-118. doi:10.1038/nature05261
- Corcoran K, Jabbour M, Bhagavathula C, Bhatt D, Bhatt S, Le Poole IC, Bhatt P. Ubiquitination of MHC class II by MARCH1 controls antigen presentation to CD4+ T cells. J Immunol. 2011;186(11):6263-6274.
产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。
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