重组人MBTPS1蛋白:研究指南与应用
重组人MBTPS1蛋白:研究指南与应用
Recombinant Human MBTPS1 Protein 是一种研究级丝氨酸蛋白酶,对应人源位点1蛋白酶(S1P),这是一种驻留于高尔基体的酶,对固醇调节元件结合蛋白(SREBPs)及其他参与胆固醇和脂质稳态的膜结合转录因子的蛋白水解激活至关重要。
- 蛋白名称
- 膜结合转录因子肽酶位点1(MBTPS1);又称位点1蛋白酶(S1P)、SKI-1
- UniProt编号
- Q14703(人源)
- 酶类别
- 枯草杆菌蛋白酶样丝氨酸蛋白酶(前蛋白转化酶家族)
- 主要功能
- 在高尔基体膜上对SREBPs和ATF6进行蛋白水解切割,激活脂质生物合成基因的下游转录
- 主要底物
- SREBP-1、SREBP-2、ATF6、CREB3家族成员、病毒糖蛋白
- 研究应用
- 胆固醇/脂质代谢、内质网应激/未折叠蛋白反应研究、病毒入侵机制、肿瘤代谢、SDS-PAGE、蛋白质印迹
- 货号
- rp367885
生物学背景与作用机制
MBTPS1(膜结合转录因子肽酶位点1),通常称为位点1蛋白酶(S1P),是一种锚定于高尔基体腔面的枯草杆菌蛋白酶样丝氨酸蛋白酶,属于前蛋白转化酶超家族,在调节性膜内蛋白水解(RIP)途径中发挥不可或缺的作用。
MBTPS1最具特征性的底物是固醇调节元件结合蛋白(SREBPs),它们是胆固醇、脂肪酸和甘油三酯生物合成的核心转录调控因子。在胆固醇充足的条件下,SREBPs与SCAP和INSIG蛋白形成复合体,被滞留于内质网膜上。当细胞内胆固醇耗尽时,SCAP将SREBPs护送至高尔基体,MBTPS1在SREBP前体的腔内环区执行第一次切割(位点1)。这一初始切割是MBTPS2(S2P)随后进行位点2切割的必要前提,最终释放N端转录因子结构域进入细胞核,上调编码LDL受体、HMG-CoA还原酶及其他脂质合成酶的基因表达。
除SREBPs外,MBTPS1在内质网应激期间还可切割激活转录因子6(ATF6),从而启动未折叠蛋白反应(UPR)。此外,它还可处理CREB3家族转录因子和某些病毒糖蛋白,充分体现了其广泛的病理生理学意义。
蛋白规格与质量属性
重组人MBTPS1蛋白(货号:rp367885)采用重组表达系统生产,提供适用于生化及无细胞检测的研究级蛋白。收货时,用户应核实以下关键质量属性:
- 纯度:此类重组蛋白通常通过SDS-PAGE和/或HPLC进行评估;请查阅批次特定质量检验报告(CoA)确认纯度百分比。
- 配方:请参阅产品数据表,了解缓冲液成分、载体蛋白添加剂(如BSA或甘油)及浓度,适当的配方对于储存和操作过程中酶活性的维持至关重要。
- 生物活性:活性通常采用荧光底物肽切割试验进行验证;请参阅批次特定CoA获取比活数值。
- 内毒素水平:对于细胞实验,应对照CoA核实内毒素含量,通常以EU/µg报告。
- 无菌性:当蛋白用于细胞培养时,请在CoA上确认无菌规格。
所有质量参数均应与随货提供的批次特定CoA进行核对。如需CoA或其他表征数据,请联系阿拉丁科学技术支持团队。
推荐操作、储存与复溶规程
正确操作重组人MBTPS1蛋白对于保持酶的完整性和实验重复性至关重要,请遵循以下通用指南:
收货与初步检查
- 收货后,立即检查瓶体的物理完整性,并确认产品已按规定在干冰或冷袋条件下运输。
- 储存前记录批号和有效期。
储存条件
- 按产品数据表说明,将冻干蛋白储存于–20 °C或–80 °C。避免反复冻融,以防酶活性降低。
- 复溶后,分装成单次用量,以减少冻融次数。
复溶
- 开瓶前,将瓶子在室温下平衡10–15分钟,以减少凝结水的产生。
- 用无菌去离子水或数据表规定的缓冲液将蛋白复溶至推荐的储存液浓度。
- 用移液器轻柔混匀,避免涡旋振荡(可能导致蛋白变性)。
- 复溶后在室温下静置10分钟,确保充分溶解后再使用或分装。
工作浓度
- 针对每种应用,通过实验确定最佳工作浓度,可参考已发表的MBTPS1活性检测文献作为起始参考。
注意:请务必查阅产品专属数据表(可在阿拉丁科学网站rp367885产品页面获取),以获取权威的缓冲液、浓度和储存信息,因批次不同配方可能有所差异。
研究应用
重组人MBTPS1蛋白是多个活跃研究领域的多功能工具:
胆固醇与脂质代谢
MBTPS1是SREBP激活的关键酶。研究人员利用重组S1P研究酶动力学、筛选针对血脂异常和代谢综合征的小分子抑制剂,并在体外验证底物切割序列。
内质网应激与未折叠蛋白反应(UPR)
由于MBTPS1在内质网应激期间切割ATF6,重组蛋白可实现ATF6加工的生化重建,支持内质网应激相关疾病(包括糖尿病、神经退行性疾病和心脏病)的研究。
病毒入侵与病原体生物学
MBTPS1(S1P)已被证明参与多种出血热病毒(如拉沙病毒、埃博拉病毒)糖蛋白的活化。重组MBTPS1支持体外底物图谱分析和抗病毒抑制剂的开发。
肿瘤代谢
SREBP激活驱动的脂肪酸合成上调是多种肿瘤的标志性特征。利用重组MBTPS1开展的研究有助于理解肿瘤性脂质重编程,并可为S1P–SREBP轴的治疗靶向提供指导。
生化检测应用
- 荧光底物肽切割检测用于酶学表征
- 蛋白质印迹和SDS-PAGE作为蛋白鉴定对照
- ELISA介导的与SCAP及其他结合伴侣的相互作用研究
- 结构生物学(晶体学、冷冻电镜)的重组蛋白来源
故障排查与最佳实践
以下指南旨在解决使用重组人MBTPS1蛋白时常见的问题:
| 问题 | 可能原因 | 建议措施 |
|---|---|---|
| 酶活性低或无活性 | 反复冻融导致降解;检测体系pH或离子强度不当;缓冲液中含有抑制性成分 | 使用新鲜分装品;确认检测缓冲液符合数据表建议;若检测需要二价阳离子,确认缓冲液中不含金属螯合剂(如EDTA) |
| 蛋白聚集或沉淀 | 复溶浓度过高;缓冲液不兼容;温度骤变 | 按推荐浓度复溶;使用前平衡至室温;低速离心去除聚集体后再进行检测 |
| SDS-PAGE出现意外条带 | 降解产物;还原与非还原条件不匹配 | 与CoA参考图谱对比;在还原和非还原条件下均进行电泳;仅在目标不是测量MBTPS1活性时,在样品制备中使用蛋白酶抑制剂混合物 |
| 实验间结果不一致 | 批次间差异;低浓度时移液误差 | 对浓缩储存液进行预稀释;使用BSA包被的管以减少吸附;每次检测中设置活性对照 |
如问题持续存在,请提供批号、CoA及实验详情,联系阿拉丁科学技术支持团队获取专业故障排查协助。
常见问题
MBTPS1与MBTPS2有何区别,这对我的实验有何影响?
MBTPS1(位点1蛋白酶,S1P)在高尔基体内对SREBP前体进行第一次腔内切割,而MBTPS2(位点2蛋白酶,S2P)是一种膜内金属蛋白酶,执行第二次膜内切割以释放转录因子结构域。MBTPS1的切割是MBTPS2活性的必要前提。若您的实验旨在体外重建SREBP加工过程,则需要按顺序使用两种酶;若研究重点是初始底物识别事件或进行位点1抑制剂筛选,则单独使用重组人MBTPS1蛋白(rp367885)即可。
在进行正式实验前,如何验证重组MBTPS1蛋白是否具有活性?
最可靠的活性验证方法是使用含有MBTPS1共识识别序列(通常为RXXL或RXXX基序)的底物肽进行荧光底物切割检测,监测荧光信号随时间的增加,同时设置无酶阴性对照及已知活性酶阳性对照。此外,请查阅阿拉丁科学提供的批次特定质量检验报告(CoA),其中应包含质控检测的比活数据。若蛋白未能切割报告底物,请检查缓冲液兼容性、是否经历过多次冻融,以及是否存在可能抑制丝氨酸蛋白酶活性的螯合剂。
重组人MBTPS1蛋白是否可用于细胞实验?
重组MBTPS1蛋白主要设计用于生化、体外及无细胞检测应用,如底物切割、抑制剂筛选和蛋白相互作用研究。若进行研究内源性SREBP加工或内质网应激反应的细胞实验,通常更适合使用过表达载体或基于CRISPR的MBTPS1敲除/敲入细胞模型。若计划通过转染或蛋白递送方法将重组蛋白引入细胞,请在CoA上核实内毒素水平,并使用经无菌过滤的蛋白,以避免干扰性炎症反应。
研究中常用的MBTPS1关键抑制剂有哪些?
研究中常用的MBTPS1抑制剂包括十酰基-RRLL-氯甲基酮肽抑制剂(dec-RRLL-CMK)和PF-429242(一种小分子竞争性抑制剂)。这些工具常与重组MBTPS1蛋白联合使用,在酶学检测中建立抑制对照,或在细胞模型中解析SREBP切割机制。使用前,研究人员应从原始文献中确认抑制剂浓度和选择性,因为在高浓度下已有脱靶效应的报道。
如何从阿拉丁科学订购重组人MBTPS1蛋白?
重组人MBTPS1蛋白在阿拉丁科学网站上的货号为rp367885。您可通过在线目录直接下单,也可联系您所在地区的阿拉丁科学销售代表或客户服务团队,咨询批量定价、定制配方或机构采购订单事宜。如有售前技术咨询,技术支持团队可提供数据表、CoA样本及针对具体应用的指导建议。
参考文献
- Brown MS, Goldstein JL. The SREBP pathway: regulation of cholesterol metabolism by proteolysis of a membrane-bound transcription factor. Cell. 1997;89(3):331-340. doi:10.1016/S0092-8674(00)80213-5
- Sakai J, Rawson RB, Espenshade PJ, et al. Molecular identification of the sterol-regulated luminal protease that cleaves SREBPs and controls lipid composition of animal cells. Mol Cell. 1998;2(4):505-514. doi:10.1016/S1097-2765(00)80150-1
- Ye J, Rawson RB, Komuro R, et al. ER stress induces cleavage of membrane-bound ATF6 by the same proteases that process SREBPs. Mol Cell. 2000;6(6):1355-1364. doi:10.1016/S1097-2765(00)00133-7
- Lenz O, ter Meulen J, Klenk HD, Seidah NG, Garten W. The Lassa virus glycoprotein precursor GP-C is proteolytically processed by subtilase SKI-1/S1P. Proc Natl Acad Sci USA. 2001;98(22):12701-12705. doi:10.1073/pnas.221447598
- Espenshade PJ, Li WP, Yabe D. Sterols block binding of COPII proteins to SCAP, thereby controlling SCAP sorting in ER. Proc Natl Acad Sci USA. 2002;99(18):11694-11699. doi:10.1073/pnas.182412799
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