重组人MCAT蛋白：研究指南与使用说明
重组人MCAT蛋白：研究指南与使用说明
Recombinant Human MCAT Protein 是线粒体II型脂肪酸合成（mtFAS II）途径的关键酶组分，使研究人员能够在体外研究丙二酰辅酶A转移、硫辛酸生物合成及线粒体代谢调控。
- 蛋白名称
- 重组人MCAT蛋白
- 货号
- rp375199
- 基因全称
- 丙二酰辅酶A：ACP转酰基酶（MCAT）
- 生物学功能
- 在线粒体II型脂肪酸合成途径中，将丙二酰基从丙二酰辅酶A转移至酰基载体蛋白（ACP）
- 研究意义
- 参与硫辛酸生物合成及线粒体呼吸链复合物的组装
- 推荐储存条件
- 储存于-20°C或-80°C；避免反复冻融
MCAT的生物学背景与功能
MCAT（丙二酰辅酶A：ACP转酰基酶，又称线粒体丙二酰辅酶A转酰基酶）是一种核编码的线粒体酶，在线粒体II型脂肪酸合成（mtFAS II）途径中发挥关键作用。与细胞质I型脂肪酸合成系统不同，mtFAS II途径位于线粒体基质中，其机制与细菌脂肪酸合成相似。
MCAT的主要催化功能是将丙二酰基从丙二酰辅酶A转移至线粒体酰基载体蛋白（ACP，由NDUFAB1编码）的磷酸泛酰巯基乙胺臂上，生成丙二酰-ACP。该转酰基反应是mtFAS II途径延伸循环中的关键限速步骤。
除脂肪酸延伸外，mtFAS II途径及MCAT活性还与硫辛酸（LA）的生物合成密切相关。硫辛酸是多种关键线粒体酶复合物（包括丙酮酸脱氢酶PDH和α-酮戊二酸脱氢酶α-KGDH）的必需辅因子。因此，MCAT对氧化磷酸化和线粒体能量代谢同样具有间接但关键的影响。
蛋白特性与制剂
重组人MCAT蛋白（货号：rp375199）采用重组表达技术生产，确保质量稳定、生物活性符合体外研究应用需求。由于制剂可能因批次而异，研究人员应查阅具体产品数据表以确认以下特性的详细信息：
- 表达系统：通常在大肠杆菌或哺乳动物/昆虫细胞系统中表达；请参阅rp375199数据表以确认所用宿主系统。
- 纯度：此类重组蛋白通常经SDS-PAGE检测纯度>85–95%；具体规格请以产品数据表为准。
- 标签信息：可能含有亲和标签（如His标签）以便于纯化；标签位置和序列请以数据表为准。
- 制剂：通常以磷酸盐缓冲盐水（PBS）或Tris缓冲液供应，常含甘油等稳定剂；确切缓冲液组成请以数据表为准。
- 分子量：由成熟蛋白序列加融合标签决定；SDS-PAGE预期条带大小请以数据表确认。
请始终参阅阿拉丁科学当前产品数据表，获取批次特定的质量检验证书（CoA）数据，包括内毒素水平、生物活性检测结果及确认的纯度信息。
操作、储存与复溶规程
重组人MCAT蛋白的正确操作和储存对维持酶活性和实验重现性至关重要。请遵循以下通用最佳实践指南；务必以产品数据表上的批次特定说明为准。
储存条件
- 冻干蛋白收到后应立即储存于-20°C或-80°C。
- 液态制剂应在-80°C长期储存。
- 避免反复冻融，因为这会导致蛋白聚集和活性损失。冷冻前应将蛋白分装为单次用量。
复溶（适用于冻干品）
- 开瓶前，将小瓶在室温下平衡10–15分钟。
- 用无菌去离子水或数据表推荐的缓冲液复溶至建议的储存浓度。
- 轻轻旋转或移液混匀；勿剧烈涡旋。
- 在室温下静置5分钟，如有可见颗粒物，可短暂离心。
- 立即分装并按指示储存。
工作稀释液
使用前在相容的检测缓冲液中即时配制工作稀释液。避免稀释后的蛋白在室温下长时间放置。每次实验应设置适当的阳性对照以验证蛋白活性。
研究应用
重组人MCAT蛋白是一种多功能试剂，适用于多种生物化学和细胞生物学研究应用，尤其是聚焦于线粒体代谢和脂肪酸生物学的研究：
- 酶活性检测：MCAT可用于体外转酰基反应检测，以表征其动力学参数（Km、Vmax），或筛选与代谢病研究相关的小分子抑制剂和激活剂。
- 蛋白质相互作用研究：作为mtFAS II机器的核心组分，MCAT可用于pull-down实验、共免疫沉淀实验或表面等离子共振（SPR）研究，以绘制其与ACP（NDUFAB1）及其他通路组分的相互作用图谱。
- 结构生物学：重组MCAT适合用于X射线晶体学或冷冻电镜研究，以阐明丙二酰基转移的结构基础。
- 抗体验证：重组MCAT蛋白可作为阳性对照抗原，用于验证抗MCAT抗体在蛋白质印迹（Western blot）、ELISA及免疫沉淀中的应用。
- 代谢疾病研究：鉴于mtFAS II、硫辛酸合成与线粒体功能障碍之间的关联，MCAT是代谢综合征、神经退行性疾病及线粒体疾病研究中的重要靶点。
- 药物发现：MCAT保守的活性位点及其在线粒体功能中的关键作用，使其成为药物发现管线中作用机制研究的潜在靶标。
质量控制与故障排查
在使用重组人MCAT蛋白时，请考虑以下质量控制措施和故障排查指南，以确保实验结果的可靠性：
质量控制检查
- 收货后通过SDS-PAGE验证蛋白的鉴别和纯度，将观察到的条带大小与数据表中标明的预期分子量进行比对。
- 对于依赖活性的应用，在将蛋白整合到新实验流程之前，应在经验证的条件下进行功能活性检测。
- 若蛋白用于细胞实验，请核查CoA中报告的内毒素水平，因为内毒素污染可能干扰实验结果。
常见问题与解决方案
- 活性丧失：最常见原因是反复冻融或储存温度不当。确保蛋白已分装为单次用量并在推荐温度下储存。
- 蛋白聚集：可能在解冻或长时间孵育过程中发生。使用前短暂离心（如10,000 × g，5分钟，4°C）以去除聚集体。
- SDS-PAGE条带大小异常：需考虑亲和标签及信号肽切割的影响。与数据表比对；微小偏差可能反映糖基化或翻译后修饰（取决于表达系统）。
- 检测信号低：确认检测缓冲液、pH值和辅因子浓度（如CoA、ACP底物）适合MCAT活性。可查阅已发表文献以获取已建立的检测条件。
如需产品特定的技术支持，请联系阿拉丁科学技术支持团队，并提供货号rp375199及批次号。
常见问题
人MCAT蛋白的生物学功能是什么？
MCAT（丙二酰辅酶A：ACP转酰基酶）催化将丙二酰基从丙二酰辅酶A转移至线粒体酰基载体蛋白（ACP），这是线粒体II型脂肪酸合成（mtFAS II）途径中的关键步骤。该途径对于硫辛酸的生物合成至关重要，硫辛酸是参与能量代谢的关键线粒体酶复合物不可或缺的辅因子。
重组人MCAT蛋白（rp375199）应如何储存以维持活性？
按数据表指示将蛋白储存于-20°C或-80°C。为防止因蛋白降解或聚集导致活性丧失，应在首次解冻后立即将蛋白分装为单次用量，避免反复冻融。请始终参阅批次特定数据表以获取最准确的储存建议。
重组人MCAT蛋白适用于哪些研究应用？
重组人MCAT蛋白适用于酶动力学和抑制剂筛选检测、蛋白质相互作用研究（如pull-down、SPR）、结构生物学研究、抗体验证（Western blot、ELISA），以及线粒体代谢疾病、硫辛酸合成和靶向线粒体脂肪酸代谢的药物发现研究。
如何确认收到的MCAT蛋白的纯度和鉴别？
收货后，进行SDS-PAGE分析，将观察到的条带与产品数据表和质量检验证书（CoA）中列出的预期分子量进行比对。如需功能性确认，可在已建立的条件下进行体外转酰基活性检测。若细胞实验需要无内毒素表现，请核查CoA上报告的内毒素水平。
重组人MCAT蛋白可用于细胞实验吗？
重组人MCAT蛋白主要设计用于体外生物化学应用。若计划用于细胞实验，请核查CoA上的内毒素水平是否符合您所用细胞类型的要求，并确认缓冲液制剂与您的检测系统相容。请参阅数据表并联系阿拉丁科学技术支持团队，获取针对您应用的具体指导。
参考文献
- Hiltunen JK, Schonauer MS, Autio KJ, Mittelmeier TM, Kastaniotis AJ, Dieckmann CL. Mitochondrial fatty acid synthesis type II: more than just fatty acids. J Biol Chem. 2009;284(14):9011-9015. doi:10.1074/jbc.R800074200
- Kastaniotis AJ, Autio KJ, Keratar JM, et al. Mitochondrial fatty acid synthesis, fatty acids and mitochondrial physiology. Biochim Biophys Acta Mol Cell Biol Lipids. 2017;1862(1):39-48. doi:10.1016/j.bbalip.2016.08.011
- Autio KJ, Kastaniotis AJ, Pospiech H, et al. An ancient genetic link between vertebrate mitochondrial fatty acid synthesis and RNA processing. FASEB J. 2008;22(2):569-578. doi:10.1096/fj.07-8986com
产品仅供科研与开发使用，不用于人体、动物、诊断或治疗。
危险品化学品经营许可证（带存储）