常见问题(FAQs)

重组人MDH1B蛋白:常见问题与技术指南

Recombinant Human MDH1B Protein是一种以重组方式生产的细胞质苹果酸脱氢酶亚型,可用于生化、酶学及代谢研究应用。

产品名称
重组人MDH1B蛋白
货号
rp373259
蛋白家族
苹果酸脱氢酶(MDH)家族,细胞质亚型
主要功能
以NAD+为辅因子,催化苹果酸可逆氧化为草酰乙酸
供应商
阿拉丁科学
预期用途
仅供科研使用(RUO)

MDH1B是什么?它在研究中为何重要?

MDH1B(苹果酸脱氢酶1B)是苹果酸脱氢酶家族的细胞质亚型。苹果酸脱氢酶催化L-苹果酸与草酰乙酸之间的可逆转化,同时伴随NAD+还原为NADH,该反应是柠檬酸循环(TCA循环)和细胞能量代谢的核心。细胞质MDH1B亚型参与苹果酸-天冬氨酸穿梭机制,将还原当量跨线粒体内膜转运,从而将细胞质糖酵解与线粒体氧化磷酸化相连接。

在癌症代谢重编程、神经系统疾病和心血管疾病研究背景下,MDH1B受到越来越多的关注。重组MDH1B的生产使研究人员能够在受控的生化环境中研究酶动力学、筛选抑制剂或激活剂,并探究蛋白质-蛋白质相互作用,避免了组织提取带来的变异性。

重组人MDH1B蛋白的储存、处理与复溶

适当的储存和处理对于保持重组人MDH1B蛋白的活性和完整性至关重要。重组蛋白的一般最佳实践如下:

  • 短期储存(最长1个月):在4°C下以提供的缓冲液保存。
  • 长期储存:分装以避免反复冻融,于−20°C或−80°C保存。反复冻融会导致酶活性丧失和蛋白质聚集。
  • 复溶:如为冻干品,用无菌去离子水或推荐缓冲液(通常为PBS或Tris基缓冲液,pH 7.4)复溶。开瓶前使小瓶平衡至室温,轻柔混匀,切勿剧烈涡旋。
  • 载体蛋白:在工作液中添加载体蛋白(如终浓度0.1–0.5%的BSA)有助于稳定稀释制品。

注意:请参阅货号rp373259随附的具体批次质量检验报告(CoA),以确认储存条件、缓冲液成分和复溶体积,因批次不同可能有所差异。

重组人MDH1B蛋白的典型研究应用

重组人MDH1B蛋白(rp373259)适用于多种体外研究应用,包括但不限于:

  • 酶活性测定:通过监测340 nm处NADH吸光度,分光光度法测定MDH1B催化苹果酸转化为草酰乙酸的活性。
  • 抑制剂和激活剂筛选:针对调节MDH1B活性的小分子进行高通量或聚焦筛选,与代谢疾病药物发现相关。
  • 蛋白质-蛋白质相互作用研究:下拉实验、共免疫沉淀对照或表面等离子体共振(SPR)实验。
  • 结构生物学:作为MDH家族成员晶体学、冷冻电镜或NMR研究的标准品或参考品。
  • 抗体验证:作为Western blot、ELISA或免疫荧光抗体验证的阳性对照抗原。
  • 代谢通量研究:涉及苹果酸-天冬氨酸穿梭机制的代谢通路体外重建。

本蛋白仅供科研使用,不适用于诊断或治疗应用。

质量、纯度及订购注意事项

阿拉丁科学重组人MDH1B蛋白(rp373259)在受控条件下生产,旨在提供稳定的纯度和活性。尽管具体的质量检验报告(CoA)数值因生产批次而异,研究人员通常可预期:

  • 纯度:该类重组蛋白通常通过SDS-PAGE评估,并可通过抗MDH1B或抗标签抗体的Western blot验证。目标纯度一般≥85%或更高,具体取决于纯化工艺。
  • 内毒素水平:通常进行内毒素检测(LAL法),以确保适用于细胞实验。
  • 生物活性:酶活性可通过NADH偶联分光光度法确认;请查阅CoA获取批次特定活性数据。
  • 制剂:蛋白质以确定缓冲液提供;请在产品数据表或货号rp373259的CoA中确认具体制剂信息。

如需额外技术文件、定制制剂或大批量采购,请联系阿拉丁科学技术支持团队。

常见问题

MDH1与MDH1B有何区别?

MDH1和MDH1B均为细胞质苹果酸脱氢酶亚型,催化相同的基本反应——苹果酸与草酰乙酸的相互转化。MDH1B被认为是MDH1亚家族中的旁系同源物或变体。由于命名规范随基因组数据更新而演变,研究人员应查阅最新基因注释数据库(如NCBI Gene、UniProt)获取最新分类和序列信息。

如何建立MDH1B酶活性测定实验?

标准MDH活性测定通过监测340 nm处NADH的氧化来检测(以草酰乙酸为底物的逆反应),或通过NAD+监测苹果酸氧化产生NADH。典型反应缓冲液含有Tris-HCl(pH 7.4–8.0)、底物(草酰乙酸或L-苹果酸)及相应辅因子(NADH或NAD+)。在25°C或37°C下连续监测340 nm处吸光度。设置无酶空白对照以校正底物自发分解。根据具体仪器和实验格式,经验性优化蛋白浓度和底物浓度。

重组人MDH1B蛋白(rp373259)是否适合用作Western blot阳性对照?

是的,重组人MDH1B蛋白非常适合作为阳性对照抗原,用于验证抗MDH1B抗体的Western blot实验。将已知量的重组蛋白与细胞或组织裂解液样品一起上样。根据蛋白序列及货号rp373259产品数据表或CoA中注明的融合标签,确认预期的分子量条带。

如何避免重复使用过程中MDH1B蛋白活性的丧失?

为保持酶活性,收到蛋白后应立即分装成单次使用量,长期储存于−80°C。避免反复冻融,这是蛋白变性和聚集的主要原因。处理稀释蛋白溶液时,考虑添加稳定性载体蛋白(如BSA)。工作期间将样品置于冰上,尽量减少室温暴露时间。

生产重组人MDH1B蛋白使用何种表达系统?

货号rp373259所用的具体表达系统(如大肠杆菌、杆状病毒/昆虫细胞、HEK293哺乳动物细胞)应在阿拉丁科学提供的产品数据表或质量检验报告中确认,因为表达宿主会影响翻译后修饰、折叠及对特定实验的适用性。请联系阿拉丁科学技术支持或参阅产品页面获取批次特定详情。

参考文献

  1. Minarik P, Tomaskova N, Kollarova M, Antalik M. Malate dehydrogenases—structure and function. Gen Physiol Biophys. 2002;21(3):257-265. PMID:12537350
  2. Hirst J. Mitochondrial complex I. Annu Rev Biochem. 2013;82:551-575. [Referenced for context on NADH and mitochondrial metabolism.] doi:10.1146/annurev-biochem-070511-103700
  3. Aladdin Scientific. Recombinant Human MDH1B Protein (rp373259) product datasheet. Aladdin Scientific internal reference: absea#PP-7172.

产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。

目录: 常见问题(FAQs)

Da — 若无特别说明,分子量单位默认为道尔顿。   Mw — 重均分子量。   Mn — 数均分子量。

产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。

引用本文

阿拉丁科学.《重组人MDH1B蛋白:常见问题与技术指南》. 阿拉丁知识库,更新于 2026年11月4日。 https://www.aladdin-e.com/zh_cn/faqs/recombinant-human-mdh1b-protein-faq.html
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