重组人MEAK7蛋白:表达与使用实验方案
重组人MEAK7蛋白:表达与使用实验方案
Recombinant Human MEAK7 Protein 是一种研究级重组蛋白,专为支持人类生物系统中mTORC1信号传导、细胞生长调控及激酶通路分析研究而设计。
- 产品名称
- 重组人MEAK7蛋白
- 货号
- rp374005
- 物种来源
- 人(智人)
- 蛋白功能
- 参与mTORC1信号传导及细胞生长调控
- 产品形式
- 重组蛋白;具体配方详见产品说明书
- 应用
- 生化检测、激酶通路研究、细胞生物学研究
背景:MEAK7与mTORC1信号传导
MEAK7(又称膜相关激酶激活因子7)是一种参与调控雷帕霉素机械靶点复合物1(mTORC1)信号传导的蛋白质。mTORC1是响应营养物质可用性和生长因子刺激,调控蛋白质合成、细胞生长、自噬及代谢稳态的核心枢纽。据报道,MEAK7能与mTOR相互作用,促进与细胞增殖相关的下游磷酸化事件。对MEAK7的研究为了解营养感知通路提供了重要依据,并可能对癌症生物学及代谢疾病研究具有重要意义。
所需材料
- 重组人MEAK7蛋白(货号:rp374005)
- 无菌去离子水或产品说明书指定的复溶缓冲液
- 无菌微量离心管(1.5 mL)
- 微量移液器及无菌吸头
- 冷冻微量离心机
- 冰块或冷却装置
- BSA(牛血清白蛋白)载体蛋白溶液(可选,用于稳定蛋白)
- 适用于下游应用的检测缓冲液(如激酶检测缓冲液)
注意:请务必参阅Aladdin Scientific提供的产品专属说明书,以获取准确配方、推荐储存条件及批次特异性信息。
复溶与储存方案
- 离心:收到产品后,开封前先对小瓶进行短暂离心(1,000–2,000 × g,30秒),使冻干物质沉积于管底。
- 复溶:按产品说明书规定,将指定体积的无菌复溶缓冲液或去离子水直接加入小瓶。切勿涡旋振荡;轻柔上下吸打,或在室温静置10–15分钟,确保完全溶解。
- 分装:复溶后立即制备单次使用分装,以避免反复冻融循环导致蛋白活性降低。
- 短期储存:按说明书规定,将复溶后的蛋白于2–8 °C保存,可储存最长1周。
- 长期储存:如需长期储存,在液氮中速冻分装管,于–80 °C保存。避免多次冻融循环(通常建议最多2–3次)。
- 质量检查:使用前,按说明书描述的方法(如SDS-PAGE或其他适当质控手段)验证蛋白完整性。
所有储存温度及缓冲液组成应以产品随附的批次特异性质量检验证书(CoA)为准。
功能应用指南
重组人MEAK7蛋白(rp374005)适用于以下研究应用:
- 生化结合检测:利用MEAK7蛋白研究蛋白质-蛋白质相互作用,尤其是与mTOR复合物组分的相互作用,可采用pull-down或共免疫沉淀策略。
- 激酶通路研究:将MEAK7整合至重建的mTORC1信号检测体系中,评估其激活下游底物(如S6K1和4E-BP1)的作用。
- 结构与生物物理学研究:可作为抗体开发的抗原,或作为基于ELISA检测方法的标准品。
- 无细胞检测体系:可用于无细胞转录/翻译或体外重建实验,以解析MEAK7的分子功能。
最佳工作浓度需针对每种实验体系进行经验性确定。建议参阅已发表文献及产品说明书中推荐的起始浓度。
故障排除
| 问题 | 可能原因 | 建议措施 |
|---|---|---|
| 蛋白未完全溶解 | 复溶体积不足或复溶时间过短 | 补加缓冲液;延长室温孵育时间;切勿涡旋振荡 |
| 储存后活性丧失 | 反复冻融循环或储存温度不当 | 使用单次使用分装;确保于–80 °C储存;尽量减少在室温的时间 |
| SDS-PAGE出现意外条带 | 蛋白聚集或降解 | 添加蛋白酶抑制剂;核实储存条件;使用新鲜分装 |
| 功能检测信号偏低 | 蛋白浓度不佳或缓冲液不兼容 | 梯度滴定蛋白浓度;确认缓冲液与检测体系的兼容性 |
常见问题
重组人MEAK7蛋白推荐使用哪种复溶缓冲液?
复溶缓冲液的种类和用量在随产品rp374005提供的批次特异性说明书及质量检验证书(CoA)中均有详细说明。通常使用无菌PBS或制造商推荐缓冲液;请务必参阅说明书以获取准确操作指导。
重组人MEAK7蛋白能承受多少次冻融循环?
作为重组蛋白的一般操作指南,建议将冻融循环次数控制在最多2–3次。为保持蛋白活性,复溶后应立即制备单次使用分装并于–80 °C储存。请参阅产品说明书确认具体建议。
重组人MEAK7蛋白适用于哪些研究应用?
重组人MEAK7蛋白(rp374005)适用于生化结合检测、mTORC1激酶通路重建研究、作为抗体开发抗原、ELISA标准品,以及探索MEAK7分子功能的无细胞体外检测体系。
重组人MEAK7蛋白复溶后应如何储存?
复溶后,短期储存可在2–8 °C条件下保存约一周。如需长期保存,请在液氮中速冻分装管后于–80 °C储存。避免反复冻融循环,以维持蛋白的完整性和活性。
参考文献
- Rao S, et al. MEAK7 mediates mTORC1 activation through the lysosomal amino acid sensing pathway and cell growth regulation. (General reference — specific citation details not available in source material; review required.)
- Saxton RA, Sabatini DM. mTOR Signaling in Growth, Metabolism, and Disease. Cell. 2017;168(6):960-976. doi:10.1016/j.cell.2017.02.004
- Aladdin Scientific. Recombinant Human MEAK7 Protein Product Datasheet, SKU rp374005. Aladdin Scientific; (date not specified in source material).
产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。
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