重组人MECOM蛋白:研究指南与实验方案
重组人MECOM蛋白:研究指南与实验方案
Recombinant Human MECOM Protein是一种研究级重组转录因子,可帮助科学家在严格控制的体外及细胞实验体系中深入探究MDS1和EVI1复合位点(MECOM)在肿瘤发生、造血调控及发育过程中的生物学功能。
- 产品名称
- 重组人MECOM蛋白
- 货号
- rp369519
- 蛋白来源
- 人源(智人)
- 蛋白类别
- 重组转录因子 / 锌指核蛋白
- 基因名称
- MECOM(又称EVI1、MDS1-EVI1)
- 主要研究领域
- 造血调控、白血病、骨髓增生异常综合征、转录调控
- 供应商参考编号
- absea#PP-4987
蛋白背景与生物学意义
MECOM(MDS1和EVI1复合位点)编码一组核锌指转录因子,在造血干细胞自我更新、胚胎发育及肿瘤发生过程中发挥关键作用。该基因座产生多种亚型,其中最具代表性的是EVI1和MDS1-EVI1,二者在N端结构域及功能特性上存在差异。
位于染色体3q26区段的MECOM过表达或重排是急性髓系白血病(AML)、骨髓增生异常综合征(MDS)及其他血液系统恶性肿瘤中有据可查的致癌事件。EVI1作为主要的致癌亚型,可抑制TGF-β信号传导并与关键染色质重塑复合物相互作用,导致阻碍髓系分化的异常转录程序。
重组人MECOM蛋白(rp369519)使研究人员能够在生化检测中直接研究上述机制,为蛋白质-DNA相互作用研究、蛋白质-蛋白质相互作用分析及功能重建实验提供稳定、特性明确的研究工具。
操作处理、复溶与储存方案
收货时:检查瓶体完整性。重组蛋白通常以干冰或冰袋运输。确认产品到货时处于冷冻或冷藏状态,并记录收货温度。
复溶:若产品为冻干粉,开瓶前短暂离心以收集粉末。按质量检验报告(CoA)中规定的缓冲液进行复溶——通常为含载体蛋白(如0.1% BSA)的无菌磷酸盐缓冲液(PBS),以稳定蛋白活性。轻柔吹打混匀,避免涡旋振荡,以防蛋白变性。
储存:
• 短期储存(≤1个月):复溶后于4 °C保存。
• 长期储存:按单次使用量分装,于−20 °C或−80 °C保存。避免反复冻融,以免降低生物活性。
• 工作分装:实验操作期间置于冰上,尽量缩短在室温下的暴露时间。
注意:请务必参阅产品专属CoA,以获取准确的缓冲液组成、蛋白浓度及储存建议,因批次不同可能存在差异。
实验应用与检测指导
重组人MECOM蛋白适用于多种生化及细胞实验研究应用,代表性用途包括:
- 凝胶迁移实验(EMSA):MECOM锌指结构域可与特定DNA序列结合。EMSA可验证DNA结合活性,并评估化合物对MECOM-DNA复合物的破坏效果。
- 免疫共沉淀(Co-IP)及拉下实验:利用重组MECOM蛋白验证其与已知结合伴侣(如CtBP、HDAC复合物及RUNX1)之间的蛋白质-蛋白质相互作用。
- 酶联免疫吸附实验(ELISA):在夹心或竞争ELISA格式中用作标准品或包被抗原,适用于抗MECOM抗体的开发与验证。
- Western Blot阳性对照:作为阳性对照或分子量标记,用于确认裂解液检测中抗体的特异性。
- 功能性/转录活性检测:整合至无细胞转录体系,或在评估MECOM介导的靶基因(如GATA2和IL-3)转录抑制时用作参考标准。
各检测格式的最佳工作浓度应通过实验摸索确定。如需特定应用的建议,请参阅已发表文献或联系Aladdin Scientific技术支持团队。
质量、纯度与法规注意事项
纯度验证:Aladdin Scientific的重组蛋白在出厂前均经过质量检测。纯度通常通过SDS-PAGE和/或HPLC进行评估。rp369519的具体纯度数值及分析数据详见产品质量检验报告(CoA),可通过申请或登录Aladdin账户门户获取。
生物活性:功能检测数据(如有)将在CoA中注明。建议研究人员在其特定检测体系中验证活性,因基质效应和检测条件可能影响实验结果。
内毒素检测:对于细胞实验,内毒素水平是关键质量参数。在哺乳动物细胞培养中使用前,请确认CoA中的内毒素规格,以避免引入混淆性炎症反应。
仅供研究使用:重组人MECOM蛋白(rp369519)仅供科学研究使用,未经批准用于人体或动物的诊断或治疗。
批次间一致性:Aladdin Scientific提供批次特异性CoA。建议开展长期研究的人员从同一批次采购足量产品,或在更换新批次时依据已建立的检测基准进行验证。
常见问题
MECOM是什么?它在癌症研究中为何重要?
MECOM(MDS1和EVI1复合位点)编码对造血干细胞自我更新至关重要的核锌指转录因子。其在3q26位点的过表达或染色体重排与急性髓系白血病(AML)及骨髓增生异常综合征(MDS)密切相关,使其成为血液肿瘤学研究的重要靶点。
如何复溶和储存重组人MECOM蛋白(rp369519)?
若为冻干粉,开瓶前短暂离心,再按CoA规定的缓冲液(通常为含0.1% BSA的PBS)复溶。长期储存时,请分装后于−20 °C或−80 °C保存,避免反复冻融。请务必参阅批次特异性CoA以获取准确操作说明。
重组人MECOM蛋白适用于哪些实验应用?
重组人MECOM蛋白适用于EMSA(DNA结合研究)、免疫共沉淀及拉下实验、Western blot阳性对照或标准品、ELISA抗原包被,以及无细胞转录检测。各应用的最佳使用浓度应通过实验摸索确定。
重组人MECOM蛋白(rp369519)适合用于细胞培养实验吗?
在哺乳动物细胞培养中使用前,请确认产品CoA中注明的内毒素水平,因内毒素偏高可能引发非特异性炎症反应,干扰实验结果。本产品仅供研究使用,不适用于治疗或诊断用途。
收货后如何确认蛋白的生物活性?
请参阅批次特异性CoA,查看Aladdin Scientific提供的功能检测数据。此外,使用已知MECOM共识DNA序列进行EMSA,或使用经验证的抗MECOM抗体进行Western blot,可在本实验室条件下进一步确认蛋白的完整性和活性。
参考文献
- Goyama S, Mulloy JC. Molecular pathogenesis of core binding factor leukemia: current knowledge and future prospects. Int J Hematol. 2011;94(2):126-133.
- Lugthart S, et al. Clinical, molecular, and prognostic significance of WHO type inv(3)(q21q26.2)/t(3;3)(q21;q26.2) and various other 3q abnormalities in acute myeloid leukemia. J Clin Oncol. 2010;28(24):3890-3898.
- Wieser R. The oncogene and developmental regulator EVI1: expression, biochemical properties, and biological functions. Gene. 2007;396(2):346-357.
产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。
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