重组人tPA蛋白:常见问题解答与技术指南
重组人tPA蛋白:常见问题解答与技术指南
Recombinant Human Tissue-Type Plasminogen Activator/tPA Protein是一种全序列重组形式的关键丝氨酸蛋白酶,通过将纤溶酶原转化为纤溶酶来启动纤溶过程,是血栓形成、止血及心血管生物学研究的重要工具。
- 产品名称
- 重组人组织型纤溶酶原激活物/tPA蛋白
- 货号
- rp330095
- 序列覆盖
- 全序列(全长)
- 蛋白家族
- 丝氨酸蛋白酶/纤溶酶原激活物
- 物种
- 人(智人)
- 参考来源
- Gxene Biotech #848
什么是重组人tPA蛋白?
组织型纤溶酶原激活物(tPA)是由人类PLAT基因编码的丝氨酸蛋白酶,在纤溶系统中发挥核心作用,催化酶原纤溶酶原转化为活性蛋白酶纤溶酶,后者随后降解纤维蛋白凝块。内源性tPA主要由血管内皮细胞分泌,并受其主要抑制剂纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)的严格调控。
重组人组织型纤溶酶原激活物/tPA蛋白(货号:rp330095)以全序列重组蛋白的形式生产,对应完整的人tPA序列。全长覆盖确保了所有功能域的存在——包括纤连蛋白指状域、表皮生长因子(EGF)样域、两个Kringle域和催化性丝氨酸蛋白酶域——这些对于纤维蛋白结合、纤溶酶原相互作用和酶活性至关重要。
主要研究应用
重组人tPA蛋白广泛应用于多个研究领域。常见应用包括:
- 纤溶和溶栓实验:用于体外研究凝块溶解机制,包括纤溶酶原激活动力学和纤维蛋白降解。
- 酶活性检测:基于底物的检测方法(如发色底物或荧光底物纤溶酶原底物),用于测量tPA催化活性及筛选抑制剂或激活剂。
- 蛋白质-蛋白质相互作用研究:研究tPA与纤维蛋白、纤溶酶原、PAI-1以及细胞表面受体(如膜联蛋白A2)的结合。
- 心血管和卒中研究:模拟血栓栓塞事件,评估与缺血性卒中治疗相关的溶栓策略。
- 细胞实验:在内皮细胞或神经元细胞模型中研究tPA介导的信号转导、受体结合和细胞反应。
由于该蛋白覆盖全序列,特别适合需要所有功能域完整的结构研究和实验。
储存、处理和复溶指南
适当的储存和处理对维持重组tPA蛋白的活性和完整性至关重要。以下为一般性指南;请始终参阅随批次提供的具体质量检验报告(CoA)以获取已确认的条件:
- 储存温度:此类重组蛋白通常在−20°C短期储存,或在−80°C长期保存。避免反复冻融,因为这可能导致聚集和酶活性丧失。
- 复溶:冻干制品应在产品数据表推荐的稀释液中复溶(通常为无菌水、PBS或含0.1% BSA的PBS等载体蛋白溶液)。开瓶前应将小瓶平衡至室温。
- 工作分装:复溶后,制备单次使用分装液以减少冻融循环次数。分装液通常可在−20°C或−80°C储存。
- 操作:尽可能在冰上操作。使用低吸附离心管,以减少蛋白质对管壁的吸附。
注意:货号rp330095的具体储存缓冲液、浓度和配方详情请参阅产品数据表和CoA。如需批次特定信息,请联系Aladdin Scientific技术支持。
质量、纯度和法规注意事项
重组人tPA蛋白(rp330095)作为研究级试剂提供,仅供体外研究使用,未经批准用于人体诊断或治疗应用。该产品参照Gxene Biotech #848,覆盖完整人tPA序列。
此类重组蛋白通常评估的质量属性包括:
- 纯度:通过SDS-PAGE和/或HPLC评估。研究人员应查阅CoA以获取批次特定的纯度数据。
- 生物活性:通过功能性实验确认,如纤溶酶原激活实验或发色底物裂解实验。活性规格在CoA上提供。
- 内毒素水平:对细胞实验至关重要;内毒素含量通过测定(通常采用LAL法)并在CoA上报告。
- 鉴别:通过Western印迹或质谱等方法确认。
如需完整的批次特定质量数据,请在订购时或收到货物后向Aladdin Scientific索取质量检验报告。
订购和支持信息
重组人组织型纤溶酶原激活物/tPA蛋白可通过货号rp330095从Aladdin Scientific购买。如需下单或索取报价,请访问Aladdin Scientific官网或联系您所在地区的销售代表。
提供给客户的技术支持资源包括:
- 产品数据表和质量检验报告(CoA)
- 技术应用说明
- Aladdin Scientific科学家提供的售前和售后技术支持
如有关于运输条件、退货或付款方式的问题,请参阅Aladdin Scientific网站的帮助和客户服务部分,或直接联系客户服务。所有产品均在旨在维持蛋白质完整性的条件下发货;详情请参阅订单随附的运输文件。
常见问题
重组人tPA蛋白(rp330095)的序列覆盖范围是什么?
重组人组织型纤溶酶原激活物/tPA蛋白(rp330095)覆盖人tPA的全序列,意味着天然蛋白的所有功能域均在重组构建体中得到体现。这种全长覆盖对于依赖域间相互作用或完整纤维蛋白结合区域的实验非常重要。
重组人tPA蛋白(rp330095)适用于细胞功能实验吗?
是的,覆盖全序列的重组tPA蛋白常用于细胞实验,包括内皮细胞反应研究、受体介导的tPA信号转导以及细胞表面tPA诱导的纤溶酶原激活研究。进行细胞实验时,务必通过质量检验报告核实内毒素水平,因为内毒素过高会干扰实验结果。请查阅rp330095的CoA以获取批次特定的内毒素数据。
如何复溶和储存重组tPA蛋白以保持其活性?
对于冻干制品,请按产品数据表上的说明使用推荐的稀释液(通常为无菌水或PBS,通常加入载体蛋白如0.1% BSA)进行复溶。复溶后,将蛋白质分装为单次使用量,并在−80°C储存以最大限度保持稳定性。避免反复冻融。开瓶前务必将小瓶平衡至室温,处理过程中在冰上操作。
该重组tPA产品使用了什么参考材料?
重组人tPA蛋白(rp330095)参照Gxene Biotech #848。需要与其他tPA参考标准进行交叉比较的研究人员,应查阅产品数据表或联系Aladdin Scientific技术支持以获取更多表征数据。
该tPA蛋白可用于抑制剂筛选实验吗?
是的,重组tPA蛋白常规用于抑制剂筛选实验,通常采用发色底物或荧光底物纤溶酶原底物,在测试化合物存在或不存在的情况下测量tPA介导的纤溶酶生成。rp330095的全序列覆盖使其适用于此类功能实验。在设计实验方案之前,请从CoA中确认具体活性数据。
参考文献
- Gxene Biotech Product Reference #848 — Recombinant Human Tissue-Type Plasminogen Activator. Internal reference cited in Aladdin Scientific product documentation.
- Rijken DC, Sakharov DV. Basic principles in thrombolysis: regulatory role of plasminogen. Thromb Res. 2001;103 Suppl 1:S41-9.
- Cesarman-Maus G, Hajjar KA. Molecular mechanisms of fibrinolysis. Br J Haematol. 2005;129(3):307-21.
产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。
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