本实验主要用于判断RNA提取物的完整性。

操作方法

RNA琼脂糖凝胶电泳

原理

RNA可以使用非变性或变性凝胶电泳进行检测。在非变性电泳中，可以分离混合物中不同分子量的RNA分子，凡是无法确定分子量。只有在变性情况下，RNA分子完全伸展，其泳动率才与分子量成正比。判断RNA提取物的完整性是进行电泳的主要目的之一。完整的未降解的RNA制品的电泳图谱应可清晰看到18s rRNA、28s rRNA、5s rRNA的三条带，且28s rRNA的亮度应为18s rRNA的两倍。

材料与仪器

总RNA提取物
DEPC水 电泳缓冲液 变性琼脂糖凝胶 上样缓冲液 甲酰胺
电泳系统 紫外透视仪

步骤

1. 将制胶用具用70%乙醇冲洗一遍，晾干备用。

2. 制胶：

称取0.5g琼脂糖粉末，加入放有36.5mL的DEPC水的锥形瓶中，加热使琼脂糖完全溶解。稍冷却后加入5mL的10x电泳缓冲液、8.5mL的甲醛。然后在胶槽中灌制凝胶，插好梳子，水平放置待凝固后使用。

3. 加样：

在一个洁净的小离心管中混合以下试剂：电泳缓冲液（10x）2μl、甲醛3.5mL、甲酰胺10mL、RNA样品3.5μl。混匀，置60℃保温10min，冰上速冷。加入3μl的上样缓冲液混匀，取适量加样于凝胶点样孔内。同时点RNA标准样品。

4. 电泳：

打开电泳仪，稳压7.5V/cm电泳。

5. 电泳结束后通过紫外透视仪观察。

注意事项

本实验中必须保持RNase污染以免RNA降解。所有试剂用DEPC水配制，用具也用DEPC水冲洗，并灭菌。

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