本实验来源于武汉大学药学院官方网站

操作方法

高效液相色谱法分离巴比妥与苯巴比妥实验

原理

高效液相色谱法是一种重要的色谱分离技术。根据所用固定相和分离机理的不同，一般将高效液相色谱分为分配色谱、吸附色谱、离子交换色谱和空间排斥色谱等。在分配色谱中，组分在色谱柱上的保留程度取决于它们在固定相和流动相之间的分配系数K：为组分在固定相中的浓度与组分在流动相中浓度之比。显然，K值越大，组分在固定相上的保留时间越长，固定相与流动相之间的极性差值也越大。因此，出现了流动相为非极性而固定相为极性物质的正相色谱法和流动相为极性而固定相为非极性的反相色谱法。目前应用最广的固定相是通过化学反应的方法将固定相溶液键合到硅胶表面上，即所谓的键合固定相。若将正构烷烃等非极性物质（如n－C18烷）键合到硅胶基质上，以极性溶剂（如甲醇和水）为流动相，则可分离非极性或弱极性的化合物。据此，采用反相液相色谱法可分离烷基苯类化合物。在反相液相色谱中，固定相的极性小于流动相，洗脱顺序取决于溶质分子的疏水性，疏水性强的保留时间长。高效液相色谱法也可以进行定量分析，根据浓度与峰面积的关系确定待测物质的含量。本实验就是基于巴比妥与苯巴比妥的极性差异对其进行分离与定量分析。

步骤

1.以流动相为溶剂，配制巴比妥、苯巴比妥的标准溶液，浓度均为0.15mg·mL-1。

2.开启仪器，设置参数。

3.待仪器稳定后，分别用注射器进混样各20微升，进样的同时，记录保留时间和保留距离。

4.进未知样20微升，记下各组分色谱峰的保留时间。

5.以标准物的保留时间为基准，给未知样品各组分定性。

6.根据标准物的峰面积，估算未知样品中相应组分的含量。

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