本法以L-T-谷氨酸α-萘胺为底物，在GGT催化下，T-谷氨酸基转移到双甘肽分于上，同时释放出游离的α-萘胺，后者与重氮试剂反应，产生红色化合物。

操作方法

血清L-T-谷氨酸转肽酶(GGT)测定实验

原理

本法以L-T-谷氨酸α-萘胺为底物，在GGT催化下，T-谷氨酸基转移到双甘肽分于上，同时释放出游离的α-萘胺，后者与重氮试剂反应，产生红色化合物。

步骤

一、 实验试剂：

1. 150mmol/L Tris，60mmol/L双甘肽溶液：称取Tris9.1g，双甘肽3.96g，溶于400ml蒸馏水中，再加蒸馏水至500ml，加少氯仿防腐，置冰箱保存，此液PH约8.0（25℃）。

2. 1mol/L HCL

3. 底物缓冲浪（8mmol/L L-T-谷氨酸α-萘胺，54mmol/L双甘肽）：称取L-T-谷氨酸α-萘胺（无结晶，MW272.3）217mg，置于小烧坏中，加人1mol/L盐酸约4ml，使完全溶解，再加人上述Tris双甘肽溶液90ml于25℃用lmoL/L盐酸调至PH8.0±0.1，然后加水至10Oml（此液在37℃，PH为7.8-7.9），置冰箱保存。

4. 2g/L对氨基苯磺酸醋酸溶液（含醋酸20％），置冰箱保存。

5. 1g/L亚硝酸钠水溶液，置冰箱保存。

6. 显色剂：lg/L亚硝酸钠水溶液4ml，加2g/L对氨基苯磺酸溶液100ml，充分混匀，当天配用。

二、 实验操作：取 16mm×100mm试管，按表操作：

以上各管混匀后放置10min，在波长530nm，比色杯光径1.0cm，用对照管调零读取测定吸光度，查标准曲线。

标准曲线绘制：

l. 1.5mmol/L α-萘胺标准液：精确称取α-萘胺214.8mg，置1000ml烧杯中加5ml无水乙醇溶解，然后加蒸馏水6O0ml，立即充分混匀，定量移入100Oml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，混匀，置棕色瓶中，冰箱保存。

2. 0.15mmol/L α-萘胺标准液，以1.5mmol/Lα-萘胺标准液用底物缓冲液作1:10稀释。

按表进行操作：

以上各管充分混合，放置10min，分光光度计波长530nm，比色杯光径1cm，一对照管调零，读取各个吸光度，以吸光度为纵轴，GGT（u/L）为横轴，作图，此即标准曲线。

参考值：成年男性：3--17u/L

成年女性：2--13u/L

注意事项

1. 超过300单位要将血清稀释后重做，结果乘以稀释倍数。

2. 每批标本可只做1-2管空白管，但黄疸及溶血标本一定单独作空白管。

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