（来源：生物化学与分子生物学实验指导，邵雪玲等，武汉大学出版社，2003）

操作方法

薄层层析

原理

硅胶 G 是一种添加了粘合剂的硅胶粉，约含12 %-13 %的石膏，它可以把一些物质从溶液中吸附于自身的表面上，利用它对各种物质的吸附能力不同，再用适当的溶剂系统展层，使不同的物质得以分开，使用显色剂显色，得到不同的 Rf 值。糖在硅胶 G 薄层上的移动速度与糖的分子量和羟基数有关，经过适当的溶剂展开后，糖在薄层上的移动速度是戊糖＞己糖＞双糖＞三糖。

材料与仪器

糖标准溶液 乙酸乙酯 乙酸 氯仿 甲醇 硫酸 二苯胺 苯胺 磷酸 丙酮
多糖
层析缸 硅胶 G 板 毛细管 烘箱 电吹风机 试管 试管架

步骤

溶液配制：

1 . 糖标准溶液: 木糖、葡萄糖、果糖和蔗糖10 mg/ml 水溶。
 
2 . 样品液：多糖的水解液。
 
3 . 展开剂: ①乙酸乙酯∶乙酸∶水=2∶1∶1；②氯仿∶甲醇=60∶40（V/V）。
 
4 . 显色剂: ①25%～50%硫酸；②二苯胺1 g，苯胺1 ml和 85%磷酸5 ml 溶于50 ml 丙酮中。

操作步骤：
 
1.将硅胶 G 板于100 ℃烘箱活化后冷却至室温，用毛细管点样，点样位置为从硅胶板下端1.5 cm，两侧2～3 cm，每个样品点相距1～1.5 cm，斑点直径2 mm。点一次吹干一次。
 
2.将展层剂于层析缸中平衡。数分钟后，将硅胶板放入。
 
3.当展层剂移至距上端2～3 cm时，取出硅胶板吹干，均匀喷上显色剂，于100 ℃显色。
 
4.15～30 min后从烘箱取出，测量 Rf 值。

常见问题

1．薄层层析与其他层析法比较有哪些优点?
2．选用展层剂的依据是什么?
3．糖的显色剂还有哪些?

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