名称：三（2-羧乙基）膦盐酸盐（TCEP•HCl） 
分子量：286.64
cas #： 51805-45-9
储存：室温下密封保存，以防氧化。

        TCEP 是一种强效、多功能、无味、无硫醇的还原剂，可广泛应用于蛋白质和其他涉及二硫键还原的研究中（图 1）。这种独特的化合物易于溶解，在许多水溶液中都非常稳定。TCEP 还原二硫键的效果不亚于二硫苏糖醇（DTT），但与 DTT 和其他含硫醇的还原剂不同的是，TCEP 无需在某些巯基反应性交联反应前去除。

图 1. 用 TCEP 还原有机二硫键。

        三烷基膦化合物还原蛋白质二硫键的能力和优点早已为人所知。膦类化合物在水溶液中稳定，可选择性地还原二硫键，而且对蛋白质中常见的其他官能团基本上没有反应。然而，由于三烷基膦气味难闻、水溶性差，因此无法广泛应用于蛋白质研究的还原剂。三（2-羧乙基）膦（TCEP）的发现克服了这些障碍。

        TCEP 甚至可以在很宽的 pH 值范围内选择性地完全还原最稳定的水溶性烷基二硫化物。在室温下，还原过程通常不超过 5 分钟。TCEP 不挥发、无味，而且与大多数其他还原剂不同，它能抵抗空气氧化。与 DTT 相比，TCEP 更稳定、更有效，并能在较低的 pH 值下还原二硫键。

溶液稳定性
        • TCEP 在水溶液、酸性溶液和碱性溶液中都很稳定。当 TCEP 直接溶于水时，pH 值约为 2.5。研究表明，在 100mM HCl、100mM NaOH 或以下任何 50mM 缓冲液中室温培养 24 小时后，TCEP 的浓度不会发生变化： 5 即使在这些缓冲液中浸泡三周后，被氧化的 TCEP 也不到 20%。
        • TCEP 在磷酸盐缓冲液中并不特别稳定，尤其是在中性 pH 值下。实验表明，TCEP 在 pH 值为 7.0 的 0.35M 磷酸盐缓冲液（PBS）中 72 小时内会完全氧化。在 pH 值为 8.0 的 0.15M 磷酸盐缓冲液中，同样的时间内会发生约 50%的氧化。在 pH 值大于 10.5 或小于 6.0 的 PBS 中，氧化作用极小。因此，如果要在 PBS 缓冲液中使用 TCEP，应在使用前立即配制工作溶液。

有效降低 pH 值
        • TCEP 可在广泛的 pH 值范围内有效还原二硫键。在一项实验中，当 pH 值为 1.5 < 9.0 时，TCEP 可在 30 秒内完全还原 2,2 ́二硫代二吡啶（2,2 ́-DTDP）。当 pH 值高于 9.0 时，只能减少 50%。
        • 在 pH < 8.0 时，TCEP 比 DTT 更有效；TCEP 甚至可以还原氧化的 DTT。

工作浓度
        • 对于大多数应用，5-50mM TCEP 提供了足够的摩尔过量，可在室温下几分钟内有效还原肽或蛋白质的二硫键。实验证明，在 pH 值为 1.5 至 8.5 的条件下，TCEP（30μM）可在 40 秒内完全还原 2,2 ́-DTDP（20μM）。据报道，当 TCEP 与二硫化物的比例为 1:1 时，需要近一个小时才能完成还原反应。

兼容应用
        • 由于 TCEP 与马来酰亚胺的反应非常缓慢，因此在进行硫醇马来酰亚胺反应时无需去除多余的 TECP。在大多数情况下，浓度小于 10-20mM 的 TCEP 与马来酰亚胺反应化学相容。
        • TCEP 可代替 DTT 或 2-巯基乙醇（2-ME）用于 SDS-PAGE 还原样品上样缓冲液；使用最终浓度为 50mM 的 TCEP。
        • 部分 "还原抗体：2-巯基乙胺（2-MEA）可还原 IgG 分子铰链区的二硫键，但不会还原连接重链和轻链的二硫键。
        • 方案示例
        在 0.1M 磷酸盐缓冲液（pH 4.6 7.5）中向 10mg/mL IgG 加入最终浓度为 3.8-4.0mM 的 TCEP；室温下孵育 20-30 分钟，然后使用脱盐柱去除 TCEP 产物。

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