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Tris-Gly-Native电泳运行缓冲液（粉末）：方案与应用

· · 发布于 2026年11月6日 · 更新于 2026年11月6日 ·

Tris-Gly-Native Running Buffer (Powder) 是一种即溶型非变性电泳缓冲液配方，专为在聚丙烯酰胺凝胶电泳过程中保持蛋白质天然构象和生物活性而设计。

产品货号: T767966
产品形式: 粉末（即溶型浓缩物）
应用领域: 天然聚丙烯酰胺凝胶电�horesis（天然PAGE）
主要成分: Tris（三羟甲基氨基甲烷）和甘氨酸
电泳条件: 非变性；不含SDS或还原剂
分离依据: 蛋白质的天然电荷、大小及形状

什么是Tris-Gly天然电泳运行缓冲液？

Tris-Gly天然电泳运行缓冲液是一种非变性电泳缓冲液，用于在保留蛋白质天然三级和四级结构及生物活性的条件下分离蛋白质。与SDS-PAGE缓冲液不同，该配方不含十二烷基硫酸钠（SDS）及二硫苏糖醇（DTT）或β-巯基乙醇等还原剂，因此蛋白质在凝胶中的迁移取决于其固有电荷、分子大小和三维形状，而非单纯依赖分子量。

阿拉丁科学提供的粉末形式（货号：T767966）是液体缓冲液储液的便捷、预称量且稳定的替代品，可减少配制时间并最大程度降低移液误差。每包配方均可溶于适量去离子水或超纯水后得到工作浓度缓冲液。

组成成分与工作原理

该缓冲液由两种主要成分组成：Tris（三羟甲基氨基甲烷）作为缓冲碱，甘氨酸在不连续缓冲体系中作为尾随离子。溶解至推荐浓度后，溶液维持微碱性pH（工作浓度下通常约为pH 8.3–8.5），使大多数蛋白质在生理至碱性pH下携带净负电荷，从而在电泳过程中向阳极迁移。

在天然不连续（Ornstein-Davis）体系中，Tris-甘氨酸缓冲液与浓缩胶和分离胶组分相互作用，形成移动边界条件，使蛋白质条带先浓缩后以高分辨率分离。由于不含变性剂，蛋白质的天然构象在整个电泳过程中得以保持，使该体系非常适合研究蛋白质-蛋白质相互作用、寡聚体状态、酶活性染色及其他依赖构象的分析。

缓冲液配制规程

以下通用规程描述了粉末形式Tris-Gly天然电泳运行缓冲液的配制方法。请务必参阅产品标签和质检报告（COA）以获取精确溶解说明。

溶解粉末：将一包内容物全部转移至洁净容量容器中，加入约800 mL去离子水或超纯水，搅拌至完全溶解。
定容：用去离子水补足至终体积（通常为1 L），以达到工作浓度（1×）。
检查pH：使用经校准的pH计确认溶液pH在预期范围内（约8.3–8.5）。除非有特别说明，否则不要用酸或碱调节pH，以免改变缓冲能力和甘氨酸离子化状态。
过滤（如需）：对于灵敏度要求高的应用，可通过0.22 µm膜过滤器过滤。
储存：配制好的缓冲液在4 °C下可保存最多2周，室温下短期使用（1–3天）。避免污染，若出现浑浊或沉淀应立即丢弃。

注意：如需天然条件，请勿向该缓冲液中添加SDS、DTT或任何变性剂。

应用与优势

Tris-Gly天然电泳运行缓冲液广泛应用于多个需要保留蛋白质天然状态的研究领域：

蛋白质-蛋白质相互作用研究：复合物在电泳过程中保持完整，可实现相互作用伴侣的可视化。
酶活性检测：天然PAGE后可进行凝胶内活性染色（酶谱法），因为酶活性得以保留。
亚型及电荷变异体分析：因翻译后修饰等原因导致电荷差异的蛋白质可在不受SDS干扰的情况下得到分辨。
寡聚体状态测定：多聚体蛋白组装体以完整复合物形式迁移，可评估四级结构。
免疫球蛋白与抗体表征：天然条件保留结合域和结构完整性。

粉末形式还具有额外的实际优势：与液体缓冲液相比保质期更长、运输重量减轻、泄漏风险降低，以及精确制造所保证的批间一致性。

常见问题排除

即使使用配方良好的缓冲液，天然PAGE也可能遇到挑战。以下故障排除指南针对最常见问题：

问题	可能原因	建议解决方案
条带弥散或拖尾	上样量过多、pH不正确或蛋白质聚集	减少蛋白质上样量；验证缓冲液pH；样品置于冰上
蛋白质不迁移	缓冲液极性错误，蛋白质在运行pH下带正电	反转电极连接；考虑在较低pH下运行或使用酸性天然PAGE
条带间分辨率差	凝胶浓度或运行条件不正确	优化丙烯酰胺浓度；降低运行温度
缓冲液中出现沉淀	溶解不完全或污染	温和加热搅拌重新溶解；使用新鲜配制的缓冲液
染色后背景过高	残余缓冲液成分干扰染色	延长脱色时间；使用推荐的染色方案

常见问题

Tris-Gly天然电泳运行缓冲液与Tris-Gly-SDS电泳运行缓冲液有何区别？

关键区别在于SDS运行缓冲液中含有十二烷基硫酸钠（SDS）。SDS使蛋白质变性并赋予其均匀负电荷，因此分离完全基于分子量。天然缓冲液不含SDS或还原剂，蛋白质依据其天然电荷、大小和形状迁移，从而保留生物活性和四级结构。

我可以向该缓冲液中添加SDS或DTT用于变性PAGE吗？

不可以。本产品专为非变性天然PAGE配制。添加SDS或DTT会将其转变为变性体系，违背天然电泳的目的，并可能产生不可预期的结果。如需变性SDS-PAGE，请使用专用的Tris-Gly-SDS电泳运行缓冲液。

配制好的Tris-Gly天然电泳运行缓冲液应如何储存？

配制好的缓冲液应密封储存于4 °C，可保存约2周。短期使用（1–3天）可在室温下储存。若出现浑浊、沉淀或微生物污染迹象，应立即丢弃。干粉应在室温下远离潮湿环境储存。

使用该缓冲液进行天然PAGE时应选择何种丙烯酰胺凝胶浓度？

最佳丙烯酰胺浓度取决于目标蛋白质的分子量和大小。通常，大蛋白质和复合物使用6–10%凝胶，较小蛋白质适用10–15%凝胶。梯度凝胶（如4–20%）可在单次电泳中实现宽范围分辨。请参阅已发表的天然PAGE方案以获取针对您目标蛋白的具体指导。

该缓冲液是否与下游活性染色或质谱分析兼容？

是的，Tris-甘氨酸天然电泳运行缓冲液通常与凝胶内酶活性染色（酶谱法）兼容，因为蛋白质保留了天然构象和活性。对于质谱分析应用，缓冲液成分（Tris和甘氨酸）可通过标准脱色、洗涤或凝胶内酶解方案去除，但应针对具体质谱工作流程验证兼容性。

参考文献

Ornstein L. Disc electrophoresis. I. Background and theory. Annals of the New York Academy of Sciences. 1964;121:321-349.
Davis BJ. Disc electrophoresis. II. Method and application to human serum proteins. Annals of the New York Academy of Sciences. 1964;121:404-427.
Gallagher SR. One-dimensional SDS gel electrophoresis of proteins. Current Protocols in Molecular Biology. 2012;Chapter 10:Unit 10.2A.

产品仅供科研与开发使用，不用于人体、动物、诊断或治疗。

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Da — 若无特别说明，分子量单位默认为道尔顿。 Mw — 重均分子量。 Mn — 数均分子量。