Turk溶液:成分、用途与常见问题解答
Turk溶液:成分、用途与常见问题解答
Turk's Solution is a classical hematological staining diluent containing dilute acetic acid and gentian violet, used to lyse erythrocytes and lightly stain leukocyte nuclei for accurate manual white blood cell counting under light microscopy.
- 主要应用
- 使用血细胞计数板进行手工白细胞(白血球)计数
- 主要活性成分
- 稀冰乙酸(溶解红细胞)和龙胆紫(对白细胞核进行染色)
- 作用机制
- 乙酸通过渗透作用溶解红细胞,同时保留白细胞;龙胆紫对细胞核进行轻度染色以便观察
- 稀释比例
- 通常血液与Turk溶液的稀释比例为1:10或1:20(请以具体操作方案为准)
- 储存条件
- 室温避光保存;具体储存条件请参见产品标签
- 产品货号
- T1530185(Aladdin Scientific)
什么是Turk溶液?
Turk溶液是血液学和细胞生物学领域的经典试剂,专为在全血样本中手工计数白细胞(白血球)而设计。该溶液由两种组分配制而成,可同时溶解数量远多于白细胞的红细胞(红血球),并对白细胞核进行轻度染色,使其在普通光学显微镜下清晰可见。
其主要成分为稀冰乙酸和龙胆紫(结晶紫)。乙酸通过渗透不平衡破坏红细胞膜,有效清除背景干扰,而龙胆紫则使白细胞核呈现紫色。这种组合使分析人员能够通过血细胞计数板(计数室)区分并计数剩余完整的白细胞。
Aladdin Scientific提供即用型Turk溶液(货号:T1530185),适用于科研实验室使用。
成分与配制
Turk溶液的经典配方由以下三种成分溶于蒸馏水制成:
- 冰乙酸——通常以较低百分比浓度加入,负责溶解红细胞。
- 龙胆紫(结晶紫)——以极低浓度使用,用于对白细胞核进行染色,避免过度着色。
- 蒸馏水——作为溶剂,用于达到正确的终体积和浓度。
市售的Turk溶液(如Aladdin Scientific提供的T1530185)提供标准化的即用型配方,可消除自行配制带来的变异性。在实验室内自行配制时,研究人员应使用经认证的分析纯试剂,并在使用前通过0.45 µm滤膜过滤,以去除可能干扰计数的颗粒物。
注意:具体百分比浓度可能因供应商配方而异,请务必参阅所用批次的质量检测报告(CoA)。
白细胞计数标准操作流程
以下概述了使用Turk溶液进行手工白细胞计数的一般操作流程,请务必结合本机构的标准操作规程(SOP)进行验证。
- 样品制备:将新鲜全血采集至含EDTA抗凝剂的采血管中,轻轻颠倒混匀。
- 稀释:取一定量血液(如10 µL或20 µL)加入适量Turk溶液,达到所需稀释倍数(通常为1:10或1:20)。轻轻混匀,静置2–3分钟,待红细胞完全溶解。
- 加样至血细胞计数板:将盖玻片置于计数室上方,通过毛细作用将少量稀释后的样品引入血细胞计数板计数室。
- 显微镜观察:静置2–3分钟,待细胞沉降。使用光学显微镜在10×或40×物镜下,在指定方格内对白细胞进行计数,白细胞核将呈紫色/紫罗兰色。
- 计算:根据稀释倍数和计数室体积,应用相应公式计算每微升或每升血液中的白细胞数量。
提示:样品制备后应尽快计数;血液与Turk溶液长时间接触可能影响细胞形态。
白细胞计数以外的应用
尽管Turk溶液最广为人知的用途是手工白细胞计数,但在科研场合中还具有其他应用:
- 有核细胞总数计数:Turk溶液可用于计数悬液中任何有核细胞群,因为乙酸会溶解无核细胞,而染料则突出显示细胞核。这对于计数来自细胞培养、腹腔灌洗液或脑脊液的细胞非常有用。
- 区分有核细胞与无核细胞:在实验血液学中,Turk溶液帮助研究人员在骨髓或脾脏细胞悬液中区分有核前体细胞与成熟红细胞。
- 细胞培养质量控制:部分实验室在细胞计数流程中使用与Turk配方类似的稀乙酸溶液,但活力评估更常用台盼蓝排除法。
研究人员应注意,Turk溶液无法区分白细胞亚型(中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞等);分类计数需要染色血涂片及其他方法。
储存、安全与操作注意事项
储存:Turk溶液应在室温(约15–25 °C)下储存,避免直接光照和热源。不使用时请将容器盖紧。具体储存说明请参阅每批产品随附的产品标签和CoA。
稳定性:即用型溶液在正确储存条件下,通常在标签注明的保质期内保持稳定。若出现沉淀或颜色变化,应予以丢弃。
安全:Turk溶液含有乙酸和龙胆紫,两者均需遵守标准实验室防护规范:
- 佩戴适当的个人防护装备(PPE):手套、实验服和护目镜。
- 避免吸入蒸气;处理大量溶液时应在通风良好的区域或通风橱中操作。
- 龙胆紫具有潜在的致突变性,并对皮肤和眼睛有刺激性;应避免接触,并按当地法规处置废弃物。
- 乙酸在较高浓度时具有腐蚀性;Turk溶液中为稀释形式,风险较低,但仍需采取标准预防措施。
有关完整危害和处置信息,请查阅Aladdin Scientific提供的安全数据表(SDS)。
常见问题
Turk溶液有什么用途?
Turk溶液主要用于手工白细胞计数。其含有稀乙酸(可溶解红细胞)和龙胆紫(可将白细胞核染成紫色),从而使白细胞在光学显微镜下通过血细胞计数板清晰可见并可被计数。此外,它还可用于计数来自细胞培养或灌洗液等来源的悬液中其他有核细胞。
Turk溶液由哪些成分组成?
Turk溶液的经典组成包括稀冰乙酸、龙胆紫(结晶紫)和蒸馏水。乙酸负责溶解红细胞,龙胆紫则对白细胞核进行染色使其可见。具体浓度可能因供应商而异,请务必参阅特定产品批次的质量检测报告。
Turk溶液可以用于计数细胞培养物中的细胞吗?
可以。Turk溶液可用于计数来自细胞培养、腹腔灌洗液或其他生物液体中的悬浮有核细胞,因为乙酸会溶解无核细胞或碎片,同时保留有核细胞。但对于细胞培养中的活力评估,台盼蓝排除法是更常用的方法。研究人员在常规使用前应针对其特定细胞类型验证操作方案。
Turk溶液应如何储存?
Turk溶液应在室温(约15–25 °C)下储存,避免直接光照和热源,并保持容器密封。请务必参阅产品标签和质量检测报告,了解每批产品的具体储存条件和保质期。若出现沉淀或明显颜色变化,应丢弃该溶液。
Turk溶液能用于白细胞分类计数吗?
不能。Turk溶液仅能用于白细胞总数计数,无法区分中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞或嗜碱性粒细胞等白细胞亚型。如需进行白细胞分类计数,必须制备血涂片并使用Wright染色或Giemsa染色等分类染色法进行染色,再由经过培训的分析人员在显微镜下检查。
参考文献
- Turk, W. (1904). Vorlesungen über klinische Hämatologie. Wilhelm Braumüller, Vienna. [Historical primary source describing the original formulation — full bibliographic details need verification.]
- Dacie, J.V. and Lewis, S.M. (Eds.). Practical Haematology. Churchill Livingstone. [Standard reference for hemocytometer-based leukocyte counting methods including diluting fluids — edition and page numbers need verification.]
- Aladdin Scientific. Product datasheet for Turk's Solution, SKU T1530185. [Certificate of Analysis and Safety Data Sheet available from Aladdin Scientific — document version and date to be confirmed.]
产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。
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