尿中17-羟类固醇为肾上层皮质所分泌的激素及其代谢产物，从尿中的排出量可反映肾上腺皮质的功能，加人56％硫酸和硫酸铵促使17-羟类固醇向有机相转移，用氯仿正丁醇混合液自尿中提取。提取物加人盐酸苯肼和硫酸与17-羟类固醇生成黄色苯肼衍生物（Porter_silber反应），与标准液经同样处理比色得其含量。本实验来源于牡丹江医学院 本科 5 年制检验专业实验指导

操作方法

尿中17-羟类固醇测定实验

原理

尿中17-羟类固醇为肾上层皮质所分泌的激素及其代谢产物，从尿中的排出量可反映肾上腺皮质的功能，加人56％硫酸和硫酸铵促使17-羟类固醇向有机相转移，用氯仿正丁醇混合液自尿中提取。提取物加人盐酸苯肼和硫酸与17-羟类固醇生成黄色苯肼衍生物（Porter_silber反应），与标准液经同样处理比色得其含量。

材料与仪器

纯化氯仿 纯化正丁醇 无水硫酸氨 盐酸苯肼 皮质醇 硫酸 浓盐酸

步骤

一、 实验试剂：

1. 纯化氯仿：250ml   2. 纯化正丁醇： 25ml

3. 无水硫酸氨：50g   4. 盐酸苯肼：65mg

5. 皮质醇标准：2ml   6. 56%硫酸：分析纯

7. 浓盐酸：分析纯

二、实验试剂配制：

1. 氯仿正丁醇混合液，按体积比10：1配制。

2. 56％硫酸：体积比

3. 苯肼-硫酸试剂：取盐酸苯肼65mg加人56%硫酸100ml加NaCL 2g 冰箱中可保存二个月。

4. 标准管：每管加0.1ml标准液置室温中干燥，盖紧放暗处保存，每次取一管使用。

三、实验测定方法：

l. 标本收集：收集24小时尿液于干洁容器内（留第一次尿应加浓HCL 5ml  防腐）量其总体积50ml样品送检。

2. 提取：取尿液3ml于50ml带塞烧瓶中，加入56％硫酸0.1ml和无水硫酸按2.5g轻摇使其溶解，加入氯仿正丁醇混合液15ml加塞振摇3分钟，将内物倒入尖底离心管内，以1500转/分离心10-15分钟，吸去上层尿液．留下氯仿正丁醇提取液备用。

3. 显色。取带塞洁净试管按下表操作：

各管用力振摇2min静止30min(或1500转/分离心15min)将上层（硫酸苯肼混合液）分别吸人洁净管内。置56℃水浴中25分钟。取出后在410nm波长用0.5cm光径比色杯，以比色空白管调零，读取各管光密度值。
四、计算：

17-羟类固醇(mg/24h)=(A-B)/C×0.02×总尿量

正常范围：男性：5-14mg/24小的尿

女性：4-14mg/24小时尿

注意事项

1. 显色反应为非特异性，葡萄糖. 果糖. Vc. 去氢Vc. 尿酸. 丙酮磺胺甲基嘧啶. 奎宁等可引起干扰。但氯仿-正丁醇混合液排除效果好，需注意尿液分离避免点滴带入显色液内。

2. 离心分层时苯肼硫酸试剂在氯仿正丁醇混合液之上放置久会沉入管底，所以要及时将苯肼-硫酸试剂吸出，吸取量只要满足比色即可，以免触动下层液体影响比色。

3. 全试剂空白值反映各种试剂的精制是否合格，每次测定需注意此值，因而试剂最好新鲜配制。

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