WDR70简介及抗体规格

WDR70（含WD重复序列蛋白70）是WD重复蛋白家族的成员，以串联WD40基序为特征，形成介导蛋白质间相互作用的β螺旋桨支架。WDR70与染色质重塑及DNA损伤应答通路相关，是细胞生物学和肿瘤研究中的重要靶点。

WDR70鼠单克隆抗体（Aladdin SKU：Ab349685；参考目录absea #KC-36160）是针对人WDR70蛋白特定表位制备的鼠源单克隆抗体。作为单克隆抗体，其批间一致性高、表位特异性明确，对于蛋白质印迹、免疫组织化学和免疫沉淀实验的可重复性至关重要。

样品制备

细胞和组织裂解液（用于WB和IP）：

1. 通过刮取或离心收集细胞，用冰冷PBS洗涤两次。
2. 用含蛋白酶抑制剂混合物的RIPA裂解液（50 mM Tris-HCl pH 7.4、150 mM NaCl、1% NP-40、0.5%脱氧胆酸钠、0.1% SDS）裂解细胞，置于冰上孵育30分钟，期间间歇涡旋混匀。
3. 在4°C下以12,000 × g离心15分钟，收集上清液。
4. 使用BCA法或Bradford法测定蛋白质浓度。
5. 将裂解液分装后于−80°C保存备用。

组织切片（用于IHC）：

1. 用10%中性缓冲福尔马林固定组织并进行石蜡包埋（FFPE），或根据需要制备冰冻切片。
2. 对于FFPE切片，在柠檬酸缓冲液（10 mM，pH 6.0）中于95–100°C加热10–20分钟进行抗原修复，然后缓慢冷却。
3. 用甲醇中3% H₂O₂处理10分钟，封闭内源性过氧化物酶活性。

注意：WDR70鼠单克隆抗体（Ab349685）的具体验证稀释比例和缓冲液应以产品数据表为准，请参阅相关资料进行确认。

各应用分步实验方案

蛋白质印迹（WB）

1. 取20–40 µg总蛋白在适当浓度的SDS-PAGE凝胶上进行电泳分离。
2. 将蛋白质转移至PVDF或硝酸纤维素膜上。
3. 用TBST配制的5%脱脂奶粉或5% BSA在室温下封闭膜1小时。
4. 按产品数据表推荐稀释比例将WDR70鼠单克隆抗体（Ab349685）稀释于封闭液中，于4°C孵育过夜。
5. 用TBST洗涤3次，每次10分钟。
6. 在室温下与适当的HRP标记抗鼠二抗孵育1小时。
7. 用TBST洗涤3次，每次10分钟，然后使用ECL底物系统检测信号。

免疫组织化学（IHC）

1. 抗原修复和过氧化物酶封闭后，用PBS冲洗切片。
2. 用5–10%正常血清（来源于二抗宿主物种）在室温下封闭非特异性结合30分钟。
3. 按推荐稀释比例加入WDR70鼠单克隆抗体（Ab349685），在湿盒中于4°C孵育过夜。
4. 用PBS洗涤切片（3次，每次5分钟），然后加入生物素化抗鼠二抗或聚合物检测系统。
5. 用DAB底物显色，苏木精复染，脱水后封片。

免疫沉淀（IP）

1. 将裂解液（总蛋白500–1000 µg）与蛋白A/G琼脂糖珠在4°C摇动预清除1小时。
2. 将上清液转至新管中，按推荐用量加入WDR70鼠单克隆抗体（Ab349685），在4°C摇动孵育过夜。
3. 加入蛋白A/G琼脂糖珠，继续在4°C孵育2–4小时。
4. 用裂解液洗涤珠子3–5次，加入2× SDS上样缓冲液，95°C煮沸5分钟洗脱结合蛋白。
5. 通过SDS-PAGE和蛋白质印迹分析洗脱液。

注意：最佳抗体浓度和稀释比例须通过实验摸索确定或参考产品数据表确认，请标记以供审核。

常见问题排查

以下排查指南针对使用WDR70鼠单克隆抗体（Ab349685）时常见的问题：

有关各应用推荐稀释比例及阳性对照组织，请务必参阅Ab349685最新产品数据表。

储存、操作和安全注意事项

储存：请按照产品数据表和瓶标上规定的条件储存WDR70鼠单克隆抗体（Ab349685）。单克隆抗体通常在−20°C长期保存。应避免反复冻融，以免降低抗体活性。建议首次使用时进行分装。

操作：使用前在冰上或4°C解冻。解冻后短暂离心收集瓶内液体。实验过程中置于冰上保存。如抗体偶联荧光基团，避免长时间光照。

安全：操作抗体制剂时，请遵循标准实验室安全规范。请参阅产品随附的安全数据表（SDS）了解危害信息。按照当地机构和法规要求处置生物材料。

注意：Ab349685的具体储存温度、缓冲液组成和有效期须以产品数据表为准，请标记以供审核。