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Western Blot常见问题分析

· · 发布于 2024年10月30日 · 更新于 2024年10月30日 ·

问题	可能原因	解决方法
背景值高	膜没有均匀浸润	PVDF 膜转膜前用100%甲醇将膜完全浸湿，转膜前用缓冲液浸泡10min
背景值高	膜或者缓冲液污染	拿取膜与吸水纸时要戴手套，更换新鲜转膜缓冲液
背景值高	封闭不充分	更换封闭液或延长封闭时间
背景值高	抗体与封闭液出现交叉反应	检测一抗、二抗与封闭液是否有交叉反应
背景值高	抗体浓度过高	做预实验检测确定一抗、二抗的最佳工作浓度
杂带多	一抗不是唯一特异的	制备单克隆抗体或者重新选取合成抗原多肽的位点制备抗体
杂带多	二抗出现非特异性结合	设立不加一抗，只加二抗的平行对照来检测二抗是否有非特异性结合
杂带多	不同的剪接体	选取抗原特异区域进行免疫
无信号或信号弱	抗体不适合于WB	设置阳性对照和内参蛋白
无信号或信号弱	抗体浓度太低	加大抗体浓度
无信号或信号弱	抗体保存不当	分装保存，避免反复冻融
无信号或信号弱	抗原不充足	增加蛋白上样量
无信号或信号弱	膜漂洗过度	减少漂洗的时间和次数
无信号或信号弱	转膜不充分	延长转膜时间或增大转膜电压

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Da — 若无特别说明，分子量单位默认为道尔顿。 Mw — 重均分子量。 Mn — 数均分子量。

产品仅供科研与开发使用，不用于人体、动物、诊断或治疗。

阿拉丁科学.《Western Blot常见问题分析》. 阿拉丁知识库，更新于 2024年10月30日。
                            https://www.aladdin-e.com/zh_cn/faqs/western-blot-faq-analysis.html

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