计算溶液所需的质量、体积或浓度。
BioReagent,for DNA and RNA applications,PCR试剂,分子生物学级,无DNA酶和RNA酶 级 ,适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。
-20°C储存,避免反复冻融。超低温运输 。请查阅批次 COA 获取详细规格。
SDS、COA、产品数据表及规格说明书均可下载。可通过批号查询获取批次 COA。
在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。
UltraBio™ Multiple Amplification Mix 是一款通用型多重扩增试剂,可应用于微生物/遗传突变检测多重扩增子文库构建。本试剂兼容超多重扩增,panel 引物重数范围为 1~1500+重,扩增长度范围为100~1800bp,GC 含量范围为 13%~75%,模板投入量低至 1ng。
本试剂原料经过严格的背景菌质控,可有效预防本底扩增导致的假阳性,同时严格的质量控制和功能验证,保证扩增的稳定性和重复性。
本试剂适用于二代测序多重靶向扩增方法微生物/遗传突变检测。
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自备材料
仪器:PCR 仪、移液器、磁力架、微型离心机、涡旋仪、琼脂糖凝胶电泳系统、紫外凝胶成像分析系统、Agilent Bioanalyzer 2100或替代仪器;
试剂: 琼脂糖、1×TAE 溶液、核酸染料、DNAmarker、 Ampure XP 磁珠或替代产品、无水乙醇(新鲜配置 80%乙醇)、无核酸酶水;
耗材:1.5 ml 离心管、0.2 ml PCR 管、移液枪头(无DNase/RNase)。
使用说明
一、多重扩增及产物检测
1、将UltraBio™ Multiplex Amplification mix 取出解冻;涡旋混匀瞬时离心,置于冰上备用。
2、在 0.2 ml PCR 管中配制如下反应混合液:
| 组分 | 体积/ 反应 (μl) | 终浓度 |
| UltraBio™ Multiplex Amplification mix | 2.5 | 4x |
| Primer Mix | 1 | 20nM (2.5~100nM) |
| 模板 DNA | X | 10ng (1~100ng) |
| 无核酸酶水 | Up to10 | / |
| Total | 10 | / |
注: 常规体系 Total 体积为10μl,可调整体范围为10~50μl;当体系体积放大时,UltraBio™ Multiplex Amplification mix 体积需等比例放大。
3、涡旋混匀,瞬时离心后将反应液收集至管底。
4、将上述 PCR 管置于 PCR 仪,运行以下反应程序:

注:
T:退火温度需要根据多重引物的退火温度 T 来设定。
**:常规为 25 cycles;可根据模板投入量适当调整。
5、第一步扩增产物可用 2 %琼脂糖电泳检测其产物分布情况或在Agilent 2100 Bioanalyzer 上进行长度分布检测。
二、扩增产物磁珠纯化
1、将AmpureXP 磁珠或替代产品从冰箱中取出平衡至室温,涡旋混匀。
2、将第一步扩增产物体积用无核酸酶水补至50ul,加入60 μl(1.2×)磁珠,充分涡旋混匀后室温静置 5 min。
3、短暂离心后将离心管置于磁力架上静置 3~5 min,待溶液澄清后,小心移去上清。
4、保持离心管置于磁力架上,往管中加入 200 μl 新鲜配置的 80%乙醇,室温静置 30 sec,小心移去上清。
5、重复第4操作,80%乙醇共洗涤两次。尽量弃 80%乙醇。
6、保持离心管置于磁力架上,开盖静置 2~3 min 使磁珠干燥至哑光。
7、加入 22 μl 的无核酸酶水重悬磁珠,充分涡旋混匀后,室温静置 2 min,将离心管短暂离心后置于磁力架上静置 1~2 min,待溶液澄清后,小心移取 20 μl 上清至新的 0.2 ml PCR 管中,进行下一步反应。纯化产物可在-20°C 长期保存。
UltraBio™ Multiple Amplification Mix is a universal multiplex amplification reagent that can be used for constructing multiplex amplicon libraries for microbial/genetic mutation detection. It is compatible with ultra-multiplex amplification, with a primer number range of 1 to 1500, amplicon length range of 100 to 1800 bp, GC content range of 13% to 75%, and a minimum template input amount of 1 ng.
The reagent undergoes strict background microbe quality control to minimize false positives from non-specific amplification.
Rigorous functional validation ensures high stability and reproducibility, making it ideal for NGS-based multiplex targeted amplification in microbial/genetic mutation detection.
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Self-Supplied Materials
1. Instruments
PCR thermal cycler, Pipettes, Magnetic stand, Microcentrifuge, Vortex mixer, Agarose gel electrophoresis system, UV gel imaging system, Agilent Bioanalyzer 2100 (or equivalent).
2. Reagents
Agarose, 1× TAE buffer, Nucleic acid dye, DNA marker, Ampure XP beads (or equivalent), Freshly prepared 80% ethanol, Nuclease-free water.
3. Consumables
1.5 mL microcentrifuge tubes, 0.2 mL PCR tubes, DNase/RNase-free pipette tips.
Protocol
I. Multiplex Amplification & Product Verification
Reagent Preparation
Thaw UltraBio™ Multiplex Amplification Mix on ice.
Vortex briefly and centrifuge before use.
Reaction Setup (10 μL Standard Volume)
| Component | Volume per Reaction | Final Concentration |
| UltraBio™ Multiplex Amplification mix | 2.5 μL | 4x |
| Primer Mix | 1 μL | 20nM (2.5~100nM) |
| Template DNA | X μL | 10ng (1~100ng) |
| Nuclease-free water | Up to10 μL | / |
| Total | 10 μL | / |
Note:
Total reaction volume can be scaled to 10–50 μL (adjust mix proportionally).
Primer concentration and annealing temperature (T) should be optimized for each panel.
Mixing & Centrifugation
Vortex gently and centrifuge briefly to collect liquid.
PCR Cycling Program

*T: Annealing temperature depends on primer panel (optimize empirically).
Cycle number: Adjust based on template input (default: 25 cycles).
Bead Equilibration
Warm Ampure XP beads to room temperature; vortex thoroughly.
Bead Binding
Dilute PCR products to 50 μL with nuclease-free water.
Add 60 μL beads (1.2× ratio), vortex, and incubate 5 min at RT.
Wash Steps
Place tubes on a magnetic stand for 3–5 min; discard supernatant.
Wash twice with 200 μL fresh 80% ethanol (30 sec per wash).
Air-dry beads for 2–3 min until matte.
Elution
Resuspend beads in 22 μL nuclease-free water; incubate 2 min at RT.
Transfer 20 μL supernatant to a new PCR tube.
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| 批号(Lot Number) | 证书类型 | 货号 |
|---|---|---|
| 分析证书 | FP1508887 | |
| 分析证书 | FP1508887 |
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