葡萄糖脱氢酶 (GDH-FAD)

CAS: 37250-84-3 货号: G1493019 EC号: 679-515-3
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级别和纯度: 生物活性 ? 生物活性级(Bioactive)—— 经验证在功能检测中保持生物活性。当分子须具有功能活性而不仅是纯度时使用。 重组 ? 重组(Recombinant)—— 通过重组表达生产,序列确定、批次稳定。适用于来源明确、无动物源的可重现蛋白。 ActiBioPure™ ? ActiBioPure™ —— 阿拉丁面向生物活性和重组产品的优质系列。当同时需要高纯度和保持生物活性时使用。 高性能 ? 高性能级 —— 纯度和性能特性经过优化。适用于普通等级无法满足的灵敏分析。 EnzymoPure™ ? EnzymoPure™ —— 阿拉丁的高质量酶解决方案系列。当酶纯度和明确活性决定检测或工艺性能时使用。 ≥700 U/mg powder
Accession #
P18173
表达系统
酱油曲霉
生物活性
≥700 U/mg powder
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ActiBioPure™,EnzymoPure™,生物活性,重组,高性能 级 ,适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。

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储存与运输

避光,-20°C储存,避免反复冻融。超低温运输 。请查阅批次 COA 获取详细规格。

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质量文档

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文献证明

在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。

概述

 重组葡萄糖脱氢酶 (GDH-FAD)  是一种对麦芽糖和木糖反应性低的FAD依赖性葡萄糖脱氢酶。它具有高稳定性,即使在低温下也能保持其反应性。


d-葡萄糖 + 受体 → d-葡萄糖酸-1,5-内酯 + 还原受体


规格

外观:黄色冻干粉
活性:≥700 U/mg 冻干粉
污染物:
NAD 葡萄糖脱氢酶 < 1.0×10⁻²%
β- 葡萄糖苷酶 < 1.0×10⁻²%
己糖激酶 < 1.0×10⁻²%
α- 葡萄糖苷酶 < 1.0×10⁻²%


特性

分子量:约 85 千道尔顿(通过 SDS - 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定)
结构:单体,每摩尔糖蛋白含 1 摩尔黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)
米氏常数:2.2×10⁻² M(D - 葡萄糖)
最适 pH:7.0-7.5                                                                Fig. 1
pH 稳定性:4.5-8.0                                                            Fig. 2
最适温度:40 - 50℃                                                          Fig. 3
热稳定性(液态): 45℃ 以下                                         Fig. 4
热稳定性(粉末状):在 30℃ 下稳定至少 20 天          Fig. 5
特异性:                                                                             Table 1 
抑制剂:Mn²⁺,Ag⁺






测定方法原理

通过分光光度法在 600nm处测量 2,6 - 二氯靛酚(DCIP)因还原导致的蓝色消退情况。


试剂

A. D - 葡萄糖溶液,2 M:72g D - 葡萄糖溶于 200 ml 蒸馏水。
B. 磷酸钾缓冲液,0.1 M,pH 7.0:将 0.1 M 溶液和 0.1 M 溶液混合,配制成 pH 7.0 的溶液。
C. 2,6 - 二氯靛酚(DCIP)溶液,1.8 mM:58.7 mg DCIP 溶于 100ml 蒸馏水。
D. 吩嗪硫酸甲酯(PMS)溶液,30 mM:91.9 mg PMS 溶于 10ml 蒸馏水。
E. 酶稀释缓冲液:10 mM 磷酸钾缓冲液,pH 6.0,含 0.1% 牛血清白蛋白(BSA)。
样品:测量前即刻,用酶稀释缓冲液(试剂 E)溶解冻干粉酶,使终浓度约为 0.4 μg/ml。


步骤

1. 向比色皿(光程:1cm)中移取以下试剂:
600 μL    D - 葡萄糖溶液(试剂 A)
2050 μL  pH 7.0 的磷酸钾缓冲液(试剂 B)
150 μL    DCIP 溶液(试剂 C)

2. 在 37°C 平衡约 3 分钟。

3. 加入 0.1 ml  PMS 溶液(试剂 D)并混合。

4. 加入 0.1 ml 样品并混合。

5.在 37°C 恒温的分光光度计中,以水为参比,记录 1 分钟内(30 - 90 秒)600 纳米处吸光度的下降情况,然后利用曲线的线性部分计算每分钟的吸光度变化(ΔAS​)。空白溶液是通过加入酶稀释缓冲液(试剂 E)而非样品来配制的(ΔA0​)。


计算

酶活性可通过以下公式计算:



20.4: 测定条件下 2,6 - 二氯靛酚(DCIP)的毫摩尔消光系数  (cm²/μmol‌)
1.0:光程长度(cm)
df:稀释因子


Recombinant Glucose Dehydrogenase (GDH-FAD) is an FAD-dependent glucose dehydrogenase with low reactivity toward maltose and xylose. It has high stability and maintains its reactivity even at low temperatures.


D-Glucose + acceptor → D-Glucono-1,5-lactone + reduced acceptor 


Specifications

Appearance: Yellow lyophilized powder
Activity: ≥700 U/mg lyophilized powder
Contaminants: 

NAD Glucose Dehydrogenase < 1.0×10⁻²%
β-Glucosidase < 1.0×10⁻²%
Hexokinase < 1.0×10⁻²%
α-Glucosidase < 1.0×10⁻²%


Characteristics

Molecular weight: Approximately 85 kDa (determined by SDS-PAGE)
Structure: Monomer, 1 mol FAD per mol glycoprotein
Michaelis constant: 2.2×10⁻² m (D-glucose)

Optimal pH: 7.0-7.5                                                                                           Fig. 1
pH stability: 4.5-8.0                                                                                           Fig. 2
Optimal temperature: 40 - 50°C                                                                        Fig. 3
Thermal stability (liquid form): Below 50°C                                                       Fig. 4

Thermal stability (powder form):  stable at 30°C for at least 20 days               Fig. 5

Specificity:                                                                                                        Table 1  
Inhibitor: Mn²⁺, Ag⁺







ASSAY PROCEDURE

Principle

The disappearance in the blue color of DCIP due to reduction is measured spectrophotometrically at 600 nm.

Reagents
A. D-Glucose solution, 2 M: 72 g D-glucose/200 ml distilled water.
B. Potassium phosphate buffer, 0.1 M, pH 7.0: Mix 0.1 m KH₂PO₄‌​ solution and 0.1 M KH₂PO₄‌​ solution to make a pH 7.0 solution. 

C. 2,6-Dichloroindophenol (DCIP) solution, 1.8 mM: 58.7 mg DCIP/100 ml distilled water.
D. Phenazine methosulfate (PMS) solution, 30 mM: 91.9 mg PMS/10 ml distilled water.
E. Enzyme dilution buffer: 10 mM potassium phosphate buffer, pH 6.0, containing 0.1% bovine serum albumin (BSA).
Sample: dissolve the lyophilized enzyme to final concentration about 0.4 μg/mL with enzyme dilution buffer (Reagent E) immediately before measurement.

Procedure

1. Pipette the following reagents into a cuvette (light path: 1 cm):
600 μL    D-glucose solution                                 (Reagent A)
2050 μL  potassium phosphate buffer, pH 7.0      (Reagent B)
150 μL    DCIP solution                                         (Reagent C)

2. Equilibrate at 37°C for about 3 minutes.

3. Add 0.1 ml PMS solution (Reagent D) and mix.

4. Add 0.1 ml sample and mix.

5. Record the decrease of absorbance at 600 nm against water for 1 min. (30 – 90 sec) in a spectrophotometer thermostated at 37°C, and calculate the ΔA per min using the linear portion of the curve (ΔAS​). The blank solution is prepared by adding Enzyme dilution buffer (Reagent E) instead of sample (ΔA0​).


Calculation

The activity can be calculated by the following formula:

20.4: Millimolar extinction coefficient of DCIP under the assay condition (cm²/μmol‌)
1.0: Light pass length (cm)
df: Dilution factor

规格

产品名称
葡萄糖脱氢酶 (GDH-FAD)
别名
葡萄糖脱氢酶(FAD依赖) | FAD 依赖型葡萄糖脱氢酶
英文别名
D-Glucose : acceptor 1-oxidoreductase | glucose 1-dehydrogenase (FAD, quinone) | FAD-dependent glucose dehydrogenase | glucose dehydrogenase | Glucose Dehydrogenase (FAD-dependent) | GDH-FAD | FAD-GDH | Glucose 1-dehydrogenase | Gld
规格或纯度
生物活性, 重组, ActiBioPure™, 高性能, EnzymoPure™, ≥700 U/mg powder
生化机理
Essential for cuticular modification during development.
生物活性
≥700 U/mg powder
表达系统
酱油曲霉
来源
重组表达
预测分子量
90 kDa (SDS-PAGE)
CAS编号和信息
37250-84-3
酶学委员会编号
EC 1.1.5.9
分子类型
酶
产品线
生物产品
储存与运输
物理形态
冻干(Lyophilized)
浓度
≥700 U/mg powder
复溶
Reconstitute in 10mM Potassium phosphate buffer, 0.1% BSA, pH 6.0.
储存条件
避光,-20°C储存,避免反复冻融
运输条件
超低温运输
稳定性与储存
长期储存-20℃;复溶后建议分装,避免反复冻融;避光。
单位定义
One unit (U) causes the reduction of one micromole of DCIP per minute under the conditions described below.

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批号(Lot Number) 证书类型 货号
ZJ26F1039795 分析证书 G1493019
ZJ25F1029011 分析证书 G1493019
ZJ25F1029010 分析证书 G1493019
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