计算溶液所需的质量、体积或浓度。
ActiBioPure™,EnzymoPure™,生物活性,重组,高性能 级 ,适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。
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在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。
重组葡萄糖脱氢酶 (GDH-FAD) 是一种对麦芽糖和木糖反应性低的FAD依赖性葡萄糖脱氢酶。它具有高稳定性,即使在低温下也能保持其反应性。
d-葡萄糖 + 受体 → d-葡萄糖酸-1,5-内酯 + 还原受体
规格
外观:黄色冻干粉
活性:≥700 U/mg 冻干粉
污染物:
NAD 葡萄糖脱氢酶 < 1.0×10⁻²%
β- 葡萄糖苷酶 < 1.0×10⁻²%
己糖激酶 < 1.0×10⁻²%
α- 葡萄糖苷酶 < 1.0×10⁻²%
特性
分子量:约 85 千道尔顿(通过 SDS - 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定)
结构:单体,每摩尔糖蛋白含 1 摩尔黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)
米氏常数:2.2×10⁻² M(D - 葡萄糖)
最适 pH:7.0-7.5 Fig. 1
pH 稳定性:4.5-8.0 Fig. 2
最适温度:40 - 50℃ Fig. 3
热稳定性(液态): 45℃ 以下 Fig. 4
热稳定性(粉末状):在 30℃ 下稳定至少 20 天 Fig. 5
特异性: Table 1
抑制剂:Mn²⁺,Ag⁺



测定方法原理
通过分光光度法在 600nm处测量 2,6 - 二氯靛酚(DCIP)因还原导致的蓝色消退情况。
试剂
A. D - 葡萄糖溶液,2 M:72g D - 葡萄糖溶于 200 ml 蒸馏水。
B. 磷酸钾缓冲液,0.1 M,pH 7.0:将 0.1 M 溶液和 0.1 M 溶液混合,配制成 pH 7.0 的溶液。
C. 2,6 - 二氯靛酚(DCIP)溶液,1.8 mM:58.7 mg DCIP 溶于 100ml 蒸馏水。
D. 吩嗪硫酸甲酯(PMS)溶液,30 mM:91.9 mg PMS 溶于 10ml 蒸馏水。
E. 酶稀释缓冲液:10 mM 磷酸钾缓冲液,pH 6.0,含 0.1% 牛血清白蛋白(BSA)。
样品:测量前即刻,用酶稀释缓冲液(试剂 E)溶解冻干粉酶,使终浓度约为 0.4 μg/ml。
步骤
1. 向比色皿(光程:1cm)中移取以下试剂:
600 μL D - 葡萄糖溶液(试剂 A)
2050 μL pH 7.0 的磷酸钾缓冲液(试剂 B)
150 μL DCIP 溶液(试剂 C)
2. 在 37°C 平衡约 3 分钟。
3. 加入 0.1 ml PMS 溶液(试剂 D)并混合。
4. 加入 0.1 ml 样品并混合。
5.在 37°C 恒温的分光光度计中,以水为参比,记录 1 分钟内(30 - 90 秒)600 纳米处吸光度的下降情况,然后利用曲线的线性部分计算每分钟的吸光度变化(ΔAS)。空白溶液是通过加入酶稀释缓冲液(试剂 E)而非样品来配制的(ΔA0)。
计算
酶活性可通过以下公式计算:

20.4: 测定条件下 2,6 - 二氯靛酚(DCIP)的毫摩尔消光系数 (cm²/μmol)
1.0:光程长度(cm)
df:稀释因子
Recombinant Glucose Dehydrogenase (GDH-FAD) is an FAD-dependent glucose dehydrogenase with low reactivity toward maltose and xylose. It has high stability and maintains its reactivity even at low temperatures.
D-Glucose + acceptor → D-Glucono-1,5-lactone + reduced acceptor
Appearance: Yellow lyophilized powder
Activity: ≥700 U/mg lyophilized powder
Contaminants:
NAD Glucose Dehydrogenase < 1.0×10⁻²%
β-Glucosidase < 1.0×10⁻²%
Hexokinase < 1.0×10⁻²%
α-Glucosidase < 1.0×10⁻²%
Molecular weight: Approximately 85 kDa (determined by SDS-PAGE)
Structure: Monomer, 1 mol FAD per mol glycoprotein
Michaelis constant: 2.2×10⁻² m (D-glucose)
Optimal pH: 7.0-7.5 Fig. 1
pH stability: 4.5-8.0 Fig. 2
Optimal temperature: 40 - 50°C Fig. 3
Thermal stability (liquid form): Below 50°C Fig. 4
Thermal stability (powder form): stable at 30°C for at least 20 days Fig. 5
Specificity: Table 1
Inhibitor: Mn²⁺, Ag⁺



Principle
The disappearance in the blue color of DCIP due to reduction is measured spectrophotometrically at 600 nm.
Reagents
A. D-Glucose solution, 2 M: 72 g D-glucose/200 ml distilled water.
B. Potassium phosphate buffer, 0.1 M, pH 7.0: Mix 0.1 m KH₂PO₄ solution and 0.1 M KH₂PO₄ solution to make a pH 7.0 solution.
C. 2,6-Dichloroindophenol (DCIP) solution, 1.8 mM: 58.7 mg DCIP/100 ml distilled water.
D. Phenazine methosulfate (PMS) solution, 30 mM: 91.9 mg PMS/10 ml distilled water.
E. Enzyme dilution buffer: 10 mM potassium phosphate buffer, pH 6.0, containing 0.1% bovine serum albumin (BSA).
Sample: dissolve the lyophilized enzyme to final concentration about 0.4 μg/mL with enzyme dilution buffer (Reagent E) immediately before measurement.
Procedure
1. Pipette the following reagents into a cuvette (light path: 1 cm):
600 μL D-glucose solution (Reagent A)
2050 μL potassium phosphate buffer, pH 7.0 (Reagent B)
150 μL DCIP solution (Reagent C)
2. Equilibrate at 37°C for about 3 minutes.
3. Add 0.1 ml PMS solution (Reagent D) and mix.
4. Add 0.1 ml sample and mix.
5. Record the decrease of absorbance at 600 nm against water for 1 min. (30 – 90 sec) in a spectrophotometer thermostated at 37°C, and calculate the ΔA per min using the linear portion of the curve (ΔAS). The blank solution is prepared by adding Enzyme dilution buffer (Reagent E) instead of sample (ΔA0).
Calculation
The activity can be calculated by the following formula:
20.4: Millimolar extinction coefficient of DCIP under the assay condition (cm²/μmol)
1.0: Light pass length (cm)
df: Dilution factor
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| 批号(Lot Number) | 证书类型 | 货号 |
|---|---|---|
| 分析证书 | G1493019 | |
| 分析证书 | G1493019 | |
| 分析证书 | G1493019 |
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