本试剂盒采用一步法抽提试剂与柱法纯化技术相结合，适合从各种生物样品中快速提取高纯度总RNA，包括miRNA。纯化柱优选高性能的超细玻璃纤维滤膜为材料，高效专一吸附RNA。提取的总RNA纯度高，基本没有蛋白和其它杂质的污染，可用于RT-PCR、Real Time RT-PCR、芯片分析、Northern Blot、Dot Blot、PolyA 筛选、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆等多种下游实验。
产品组分表：
| H1373525 | Component | 16 T | 50 T | Storage | | H1373525A | 裂解液TZ | 20 ml | 60 ml | 2-8 ℃ | | H1373525B | 萃取液BCP | 1.9 ml | 7 ml | RT | | H1373525C | 漂洗液SW2 | 20 ml | 60 ml | RT | | H1373525D | 洗脱液RFW | 1.8 ml | 10 ml | RT | | H1373525E | 纯化柱B10 | 16 EA | 50 EA | RT | | H1373525F | 2ml收集管 | 16 EA | 50 EA | RT |
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使用注意事项
1. 经常更换新手套。因为皮肤带有细菌，可能导致RNase污染。使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染。
2. RNA在裂解液TZ中时不会被RNase降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4 h，塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10 min，然后用水彻底清洗，再灭菌，即可去除RNase。
3. 配制溶液应使用DEPC处理水：取适量的超纯水到干净的玻璃瓶中，加入DEPC至终浓度0.1%( v/v)，混匀后放置过夜，高压灭菌。
4. 若RNA后续实验对DNA污染敏感，进行DNase I柱上消化彻底去除DNA。
5. 以下操作若无指明，均在室温下离心，离心力设定为12,000~14,000 x g。
操作步骤
1. 按下列方法对样品进行匀浆和裂解，样品经裂解液TZ匀浆后可以长期保存于-20℃，细胞匀浆后可以在2-8℃保存一周。
(1) 动物组织（不超过 60mg）: 取 10-60mg 动物组织，加入 1ml 裂解液 TZ，立即用研磨杵、玻璃匀浆器、电动研磨棒或电动匀浆器等工具进行充分匀浆，难裂解组织（如骨头，软骨，皮肤）用液氮研磨处理(参照植物处理方法)。
(2) 植物组织（不超过 100mg）:用液氮将组织样品磨成粉末状，称取 50-100mg 样品至离心管中，加入 1ml 裂解液 TZ，立即涡旋打散样品。易研磨水果或幼嫩植物组织可以无需液氮研磨，按动物组织进行操作。
(3) 贴壁细胞（不超过 1x 107）:彻底去除培养液，加入 1ml 裂解液 TZ，移液枪吸打 3-5 次，让细胞充分裂解。
(4) 悬浮细胞（不超过 1x 107）: 500 x g 离心收集细胞去除培养液，涡旋或用手指弹打松散细胞团。加入 1ml 裂解液 TZ，涡旋让细胞充分裂解。
(5) 细菌（不超过 1x 109）: 取适量处理指数生长期的培养液离心收集至离心管中，10,000 x g 离心1 分钟收集细菌，吸弃培养液。加入 1ml 裂解液 TZ 和~0.5g 酸性玻璃珠（0.1~0.6mm），涡旋10 分钟裂解细菌。
(6) 液体样品（不超过 100µl）：取不超过 100µl 细胞重悬液、匀浆液、血液黄层、骨髓、抗凝血液或体液等液体样品到 1.5ml 离心管中，加入 1ml 裂解液 TZ，立即涡旋混匀让细胞裂解，样品粘稠时可以用移液器反复吸打几次。
2. 室温放置3~5分钟裂解细胞。
3. 按1ml裂解液TZ加入100µl萃取液BCP，用手快速上下振荡15~20秒，室温放置3分钟。用涡旋取代振荡会带来更多的基因组DNA污染。振荡必须快速剧烈的，缓慢颠倒会造成抽提不充分，BCP须按比例加入，过多的BCP会逼使DNA和蛋白质回到水相中，导致RNA的纯度下降。
4. 4℃，12,000xg离心15分钟。=离心后会形成三相体系。上层为水相层含有RNA，而DNA和蛋白质位于有机层(下层)和中间层。中间层的多少取决于样本类型，有些样品的中间层较少。DNA位于有机相和中间层。吸取上清液时，粘稠的基因组有可能会被吸到上清液中，轻柔的操作和转移少量上清液有利于减少DNA污染
5. 转移上清液(~500µl)至新的离心管中，加入0.5倍体积无水乙醇，涡旋混匀5秒。若需要提取得到miRNA，加入1.5倍体积的无水乙醇至上清液。
6. 把纯化柱B10装在2ml收集管中，转移混合液至纯化柱B10中，12,000 x g离心1分钟。若混合液体积超过750ul，分两次加入。
7. 倒弃滤液，把柱子装回收集管。加入500µl漂洗液SW2，12,000 x g离心1分钟。
8. 倒弃滤液，把柱子装回收集管。加入500µl漂洗液SW2，12,000 x g离心1分钟。
9. 倒弃滤液，把柱子装回收集管。12,000 x g离心2分钟。
10. 将柱子转移至1.5ml离心管，加入30~100µl洗脱液RFW至柱子膜中央，室温静置1分钟，12,000×g离心1分钟。弃去柱子，把RNA保存于-80ºC。
最小洗脱体积是30µl，若RNA产量超过30µg，推荐进行第二次洗脱。
本产品当RNA总量低于5ug时，A260/230会低于1.0。这里因为裂解液RTL和漂洗液RW1含异硫氰酸胍。异硫氰酸胍在230nm有强烈吸光值，因此A260/230主要受该胍盐影响，而不是来源于样品。研发表明，低浓度异硫氰酸胍不影响反转录，定量RT-PCR，二代测序等相关应用。出现260/230在0.2-1.0时，可以忽略并直接用于反转录等下游应用。在不堵塞柱子的情况下，适量提高样品用量，提高核酸浓度（核酸总量>10ug)时，OD260/230可以明显改善。
储存条件
该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下，可保存18个月。长时间保存，建议把裂解液TZ保存于2-8度。
ZJ25F0724697
危险品化学品经营许可证（带存储）