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HDC人二倍体细胞低血清培养基 (含酚红, 不含谷氨酰胺)
有货
为什么选择此级别
BioReagent,用于细胞培养 级 ，适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。
储存与运输
2-8°C储存,避光。低温运输 。请查阅批次 COA 获取详细规格。
质量文档
SDS、COA、产品数据表及规格说明书均可下载。可通过批号查询获取批次 COA。
文献证明
在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。
概述
HDC 人二倍体细胞低血清培养基是一种广泛使用的基础培养基，可在减少胎牛血清 (FBS) 添加量的情况下进行二倍体细胞（MRC-5、WI38、2BS 等）的培养。与经典的 MEM 培养基相比，培养过程中血清添加量可减少 80%以上，且细胞生长速率显著提高。
应用范围
支持多种二倍体细胞系（MRC-5、WI38、2BS 等）的生长。该基础培养基适用于科研和基于细胞培养的大规模生物制品的生产，但不可直接用于人体或作为药物使用。
干粉培养基配液方法
1. 向配液容器中加入最终体积 90%的纯化水(20 ~ 30 ℃)。
2. 缓慢加入 14.90 g/L 培养基干粉及 0.584 g/L 的谷氨酰胺，搅拌混合 30 ~ 60 分钟，至液体澄清。
3. 缓慢加入 2.20 g/L 的碳酸氢钠粉末，搅拌混合 3 ~ 10 分钟至溶解。
4. 用纯化水定容到最终体积，用 1M 盐酸或氢氧化钠溶液将 pH 调至 7.1 ~ 7.3。
5. 立即使用 0.22 微米的滤膜无菌过滤。
注：培养基使用前需添加 1 ~ 3%的血清。
细胞培养条件
培养体积
|
培养环境
| 参数 | 值 |
| 接种密度 | 2-4×10⁴ cells/cm² |
| 培养温度 | 36-38 ℃ |
| CO₂浓度 | 5% |
| 湿度 | > 80% RH |
细胞复苏
1. 37℃水浴中预热含有 1 ~ 3%血清的 HDC 人二倍体细胞低血清培养基（以下称HDC完全培养基）；
2. 使用 75%酒精喷洒培养基瓶，并置于生物安全柜；
3. 复苏 1 支细胞，并在 37℃水浴中，轻轻晃动冻存管，解冻 1 分钟；
4. 将冻存管中的细胞轻轻移到含有 10mL 已预热的 HDC 完全培养基的离心管中；
5. 150g-300g（约 800rpm-1200rpm）离心 5 分钟，丢弃上清液并将细胞重悬于 10mL 新鲜预热的 HDC 完全培养基中，调节活细胞密度至 2 ~ 4×10⁴ cells/cm²；
6. 取 0.5mL 细胞悬液，用细胞计数仪分析活细胞密度（×10⁶ cells/mL）和细胞活率（%）；
7. 如果细胞活率 > 90%，将细胞置于规定的环境条件下进行细胞培养。
细胞传代
以 T75 培养瓶为例：
1. 将 HDC 完全培养基放入 37℃条件下预热 20 ~ 30 min；
2. 取细胞活率 ≥ 90%、处于对数生长期中期的细胞进行传代；
3. 使用移液管将培养容器内培养基去除，加入适量的 DPBS 进行清洗，去除清洗液后重复清洗一次；
4. 加入 3mL 重组胰蛋白酶消化液，浸润所有培养表面，置室温消化 3 ~ 5 分钟；
5. 待细胞从瓶壁脱落，拍打瓶壁，加入 3mL 已预热好的 HDC 完全培养基吹打分散细胞，收集细胞，将细胞悬液室温 300g 离心 5-10 分钟；
6. 弃上清，将细胞沉淀用完全培养基重悬；
7. 根据 2 ~ 4×10⁴ cells/cm² 的接种密度和传代体积，计算所需种子液量；
8. 无菌转移所需量的种子液，添加至含所需体积的已预热 HDC 完全培养基的 T75 瓶中，并加入最终培养体积 1 ~ 3%的血清；
9. 每 2 ~ 4 天传代一次。
细胞适应
1. 常规有血清培养的细胞，无需逐步驯化，可以从 MEM+10%血清的培养基中直接接种到 HDC 完全培养基中，接种密度参考传代步骤，并需要依据具体情况而定。
2. 继续传代细胞，直到细胞稳定生长。
3. 推荐细胞传代接种密度 2 ~ 4×10⁴ cells/cm² ，每 2 ~4 天传代一次。一般 3 次传代细胞可完全适应。
细胞冻存
1. 准备处于对数生长中期的、细胞活率 > 90%、状态较好的细胞。
2. 测定活细胞密度，计算所需的冻存培养基体积，最终活细胞密度 > 1×107 cells/mL。
3. 准备所需的冻存培养基：90% HDC 完全培养基 + 10% DMSO，4℃冷藏保存。
4.按照细胞消化程序制备细胞悬液。
5. 300g 离心 5 分钟，弃去上清，用冻存培养基重新悬浮细胞。
6. 根据项目具体需要，将悬浮液进行等分保存于适宜规格的冻存管中。
7. 按照标准程序，对冻存管进行自动或手工操作降温（每分钟降 1℃）。
8. 将细胞转移到液氮罐中保存。
HDC Human Diploid Cell Low-Serum Medium is a widely used basal medium that supports the cultivation of diploid cells (such as MRC-5, WI38, 2BS, etc.) with reduced fetal bovine serum (FBS) supplementation. Compared with classic MEM medium, the serum supplementation level can be reduced by more than 80% during culture, while the cell growth rate is significantly increased.
Applications
Supports the growth of multiple diploid cell lines (MRC-5, WI38, 2BS, etc.). This basal medium is suitable for research and large-scale biopharmaceutical production based on cell culture, but it is not for direct use in humans or as a drug.
Preparation Method for Powdered Medium
1.Add purified water (20–30 °C) equivalent to 90% of the final volume to the mixing container.
2.Slowly add 14.90 g/L of medium powder and 0.584 g/L of glutamine, and stir-mix for 30–60 minutes until the solution becomes clear.
3.Slowly add 2.20 g/L of sodium bicarbonate powder, and stir-mix for 3–10 minutes until dissolved.
4.Bring to the final volume with purified water, and adjust the pH to 7.1–7.3 using 1 M hydrochloric acid or sodium hydroxide solution.
5.Immediately sterile-filter through a 0.22 μm filter membrane.
Note: Supplement with 1–3% serum before use.
Cell Culture Conditions
Culture Volumes
|
Culture Environment
|
Cell Thawing
1.Pre-warm HDC complete medium (HDC basal medium supplemented with 1–3% serum) in a 37 °C water bath.
2.Spray the medium bottle with 75% alcohol and place it in a biological safety cabinet.
3.Thaw 1 vial of cells by gently shaking the cryovial in a 37 °C water bath for 1 minute.
4.Gently transfer the cells from the cryovial into a centrifuge tube containing 10 mL of pre-warmed HDC complete medium.
5.Centrifuge at 150g–300g (approximately 800–1200 rpm) for 5 minutes. Discard the supernatant and resuspend the cell pellet in 10 mL of fresh pre-warmed HDC complete medium. Adjust the viable cell density to 2–4×10⁴ cells/cm².
6.Take 0.5 mL of the cell suspension and analyze the viable cell density (×10⁶ cells/mL) and cell viability (%) using a cell counter.
7.If cell viability is > 90%, place the cells under the specified environmental conditions for culture.
Cell Passage
Using a T75 flask as an example:
1.Pre-warm HDC complete medium at 37 °C for 20–30 minutes.
2.Use cells in the mid-logarithmic growth phase with a viability ≥ 90% for subculturing.
3.Remove the culture medium from the vessel using a pipette. Add an appropriate volume of DPBS to rinse the cells, remove the washing solution, and repeat the rinse once.
4.Add 3 mL of recombinant trypsin digestion solution to cover all culture surfaces. Digest at room temperature for 3–5 minutes.
5.After the cells detach from the flask surface, tap the flask. Add 3 mL of pre-warmed HDC complete medium, pipette gently to disperse the cells, and collect the cell suspension. Centrifuge the cell suspension at 300g for 5–10 minutes at room temperature.
6.Discard the supernatant and resuspend the cell pellet in complete medium.
7.Calculate the amount of seed stock required based on a seeding density of 2–4×10⁴ cells/cm² and the passage volume.
8.Aseptically transfer the required volume of seed stock into a T75 flask containing the required volume of pre-warmed HDC complete medium, and add 1–3% serum of the final culture volume.
9.Subculture every 2–4 days.
Cell Adaptation
1.Cells routinely cultured in serum-containing medium do not require gradual acclimatization. They can be directly inoculated from MEM + 10% serum medium into HDC complete medium. Refer to the passage steps for seeding density, and adjust according to specific conditions.
2.Continue passaging the cells until they grow stably.
3.The recommended seeding density is 2–4×10⁴ cells/cm², with subculturing every 2–4 days. Generally, cells become fully adapted after 3 passages.
Cell Cryopreservation
1.Prepare cells in the mid-logarithmic growth phase with viability > 90% and in good condition.
2.Determine the viable cell density and calculate the required volume of cryopreservation medium. The final viable cell density should be > 1×10⁷ cells/mL.
3.Prepare the required cryopreservation medium: 90% HDC complete medium + 10% DMSO, and store at 4 °C.
4.Prepare the cell suspension according to the cell digestion procedure.
5.Centrifuge at 300g for 5 minutes, discard the supernatant, and resuspend the cell pellet in cryopreservation medium.
6.Aliquot the suspension into cryovials of appropriate size according to project needs.
7.Following standard procedures, cool the cryovials automatically or manually (at a rate of 1 °C per minute).
8.Transfer the cells to liquid nitrogen storage for preservation.
规格
别名
人二倍体细胞减血清培养基
英文别名
LMH SFM（Serum-Free Medium）
规格或纯度
BioReagent, 用于细胞培养, 内毒素＜3 EU/mL
稳定性与储存
Store at 2-8℃ long term (24 months). 2-8℃. Store at dark.
英文名称
HDC Human Diploid Cell Low‑Serum Medium (with Phenol Red, without Glutamine)
储存条件
2-8°C储存,避光
运输条件
低温运输
产品线
生物产品
名称和识别符
分子类型
生物试剂/缓冲液
技术文档
高级数据
产品属性
| pH | 7.0-7.6 |
|---|
质检证书（CoA,COO,BSE/TSE 和分析图谱)
C of A & Other Certificates(BSE/TSE, COO):
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| 批号(Lot Number) | 证书类型 | 货号 |
|---|---|---|
 ZJ26F0939335 |
分析证书 | H1525354 |
技术文档和文章
细胞培养中的培养基和补充剂
目录： 技术文章
用于细胞培养
目录： 阿拉丁试剂的规格、级别和纯度
溶液计算器
常见问题
什么是「用于细胞培养」？
「用于细胞培养」表示该产品经过加工和检测，适用于细胞培养和组织工程。规格可能包括内毒素限值、微生物控制、无菌性、低 DNase/RNase/蛋白酶活性，以及在相关情况下的生物活性验证。
什么是「BioReagent」？
「BioReagent」表示该产品经过加工和检测，适用于生物和生化应用。规格可能包括内毒素限值、微生物控制、无菌性、低 DNase/RNase/蛋白酶活性，以及在相关情况下的生物活性验证。
本产品应如何储存？
请于2–8 °C、避光条件下保存。本品对光敏感，请保存在原始的避光或棕色容器中。
本产品如何运输？
本产品采用湿冰冷藏运输。收货后请立即拆包，并按上述储存条件保存。
如何获取批次专用COA？
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