计算溶液所需的质量、体积或浓度。
为什么选择此级别
，适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。
储存与运输
-20°C储存。超低温运输 。请查阅批次 COA 获取详细规格。
质量文档
SDS、COA、产品数据表及规格说明书均可下载。可通过批号查询获取批次 COA。
文献证明
在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。
概述
热激条件：95℃，3 min
外切酶活性：3’→5’
扩增重数：单重/多重
荧光定量RT-PCR：√
额外添加AT载体连接：√
推荐项目：RNA病毒定量、cDNA合成、RNA测序
产品说明：
HiFi Seq Hotstart DNA polymerase 是通过基因工程改造的工程酶，在无需辅助蛋白及额外的 DNA 结合功能域的条件下提高了对 DNA 模板的亲和力。相比于其他野生型的 B 族 DNA 聚合酶，HiFi Seq Hotstart DNA 聚合酶强大的持续合成能力能够显著的提高扩增产物量、扩增速率以及灵敏度，同时长片段扩增和复杂模板的扩增能力(高 AT 或者高 GC 模板)也有明显的提高。
HiFi Seq Hotstart DNA polymerase 有 5’→3’聚合酶活性和 3’→5’外切酶活性(校对活性)，无 5’→3’外切酶活性。强大的3’→5’外切酶活性保证了 DNA 扩增过程中的准确率，HiFi Seq Hotstart DNA polymerase 保真性是野生型 Taq DNA 聚合酶的100 倍，是其他 B 族 DNA 聚合酶的 10 倍。
产品特点
1、扩增效率高，能够在较少的循环数下得到较高的产物量；
2、保真性高、无明显的碱基偏好性；
3、灵敏度高，可对低至 1ng 起始模板进行富集。
产品内容
HiFi Seq Hotstart DNA polymerase（1U/ul）
5×HiFi seq buffer
10×Enhancer
适用范围
NGS DNA 文库的富集、基因表达克隆、基因定点突变、细胞内基因点突变的分析
PCR 扩增操作流程
1、提前取出 5×HiFi seq buffer、10×Enhancer 置于室温融化，如果有沉淀析出，请彻底混匀溶解后使用，HiFi Seq Hotstart DNA polymerase 置于冰上备用。
2、按照下表配制 PCR 体系，注意此步骤需于冰浴中操作。
1）反应体系可以设置在 10-50μl 之间，试剂使用量可以按照比例调整，不推荐使用>50μl 体系；
2）1×HiFi seq buffer 包含 2.5mM Mg2+(1×)，如果体系需要更高浓度的 Mg2+可以额外的添加；
（！请注意Mg2+的2+为上角标）
3）在初次测试时，50μl 反应体系建议基因组模板使用量为 10-100ng，稍微复杂模板使用量为 0.1-1ng。
3、按下表设置 PCR 仪反应程序，开启热盖，温度设置于 105℃。
1）预变性时间 95℃ 3min 对于常规模板是足够的，对于 GC大于等于70%模板建议将预变性时间延长至 5min；
2）体系中高盐离子浓度会影响 DNA 溶解，为保证复杂 GC 模板能够完全变性，建议将变性温度调整到 98℃。高盐 buffer 同时也会影响引物的退火，优化后的退火温度要略高于常规的 PCR 体系，初次反应建议使用 56℃为退火温度,若反应不理想,则可以每调整 3℃测试一次的方法来确定最适的退火温度；
3）两步法扩增程序，建议退火/延伸范围 65-68℃，延伸时间按 30-60 sec/kb 计算；
4）常规条件下目的片段小于等于1kb，延伸时间按 15sec/kb 计算，当目的片段>1kb，或者要提高产物量，延伸时间按 30 sec/kb 计算；
5）为获得较高的保真性，建议扩增循环数小于等于25cycles，扩增循环数越高，错配率越高。
规格
产品名称
HiFi Seq DNA 聚合酶
规格或纯度
1U/μL
分子类型
酶
产品线
生物产品
储存与运输
储存条件
-20°C储存
运输条件
超低温运输
单位定义
1 单位（U）HiFi Seq Hotstart DNA polymerase 活力定义为在 72℃、30 min 内，以活性化的大马哈鱼精子 DNA 作为模板/引物，将10 nmol 的dNTPs 掺入酸不溶性沉淀所需的酶量。
技术文档
高级数据
质检证书（CoA,COO,BSE/TSE 和分析图谱)
C of A & Other Certificates(BSE/TSE, COO):
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技术文档和文章
PCR Laboratory Contamination Prevention and Efficient Reagent Application: —Optimizing Experimental Steps and Choosing
目录： 技术文章
A Functional Systems Review of Cellular Nucleic Acid Metabolism and Regulatory Enzymes in Gene Expression, RNA Homeostasis, and Immune Defense
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溶液计算器
常见问题
本产品应如何储存？
请于?20 °C条件下保存。需冷冻保存以维持规定的有效期。
本产品如何运输？
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