所需材料

开始操作前，请准备以下材料：

• LB琼脂粉末（Aladdin Scientific，货号：L1528380）
• 蒸馏水或去离子水
• 适宜的玻璃瓶或锥形瓶（可高压灭菌，容积至少为液体体积的2倍）
• 磁力搅拌子及加热搅拌器
• 高压灭菌锅
• 温度计或温度探针
• 无菌90 mm（或所需规格）一次性培养皿
• 酒精灯或生物安全柜（层流净化台）
• 封口膜或培养皿存储袋
• 个人防护装备：实验服、隔热手套、护目镜

可选：如需制备选择性培养基，请提前准备过滤除菌的抗生素储液（如氨苄西林、卡那霉素）。

分步操作规程

第1步 – 称量与溶解

请参阅L1528380产品标签以确认每升推荐用量。通常将适量LB琼脂粉末转入洁净可高压灭菌的玻璃瓶或锥形瓶中，加入约80%目标体积的蒸馏水或去离子水，置于加热搅拌器上以磁力搅拌至粉末完全溶解、溶液均匀透明，再补水至终体积。

第2步 – 高压灭菌

用泡沫塞或棉塞松散封口，贴上高压灭菌指示胶带。以液体灭菌程序在121°C、15 psi条件下高压灭菌15–20分钟。待压力自然释放后，戴隔热手套小心取出烧瓶——液体温度极高，请注意防烫。

第3步 – 冷却至倒板温度

将烧瓶置于50–55°C水浴中，或在实验台上自然冷却，期间偶尔轻轻摇动以均匀散热。用温度计监控温度。切勿让琼脂凝固。如需制备选择性培养基，应在此阶段（50–55°C时）加入相应抗生素，以防止高温使抗生素失活。

第4步 – 倒板

在生物安全柜内或在酒精灯旁（保持无菌操作）进行倒板。将瓶口过火消毒后，向每个90 mm培养皿中倒入约25–30 mL熔融LB琼脂，立即盖好皿盖。将培养皿置于水平台面上静置20–30分钟，待其在室温下凝固。琼脂表面应光滑均匀、无气泡。若出现气泡，可在琼脂凝固前用酒精灯火焰在表面快速扫过以消泡。

第5步 – 干燥培养皿（可选但推荐）

琼脂凝固后，将培养皿倒置，在生物安全柜中微开皿盖，或置于37°C培养箱内干燥20–30分钟。此步骤可去除培养基表面多余水分，减少卫星菌落的形成。

储存条件与有效期

已倒好的培养皿：将培养皿倒置（琼脂面朝上）叠放于密封塑料袋中，防止脱水和污染。置于2–8°C避光保存，在制备后4周内使用。使用前请将培养皿恢复至室温（或37°C），以防止琼脂表面产生冷凝水。

未开封的LB琼脂粉末（L1528380）：密封后置于阴凉干燥处，避免受潮和直接光照。具体有效期和储存条件请参阅产品标签及检验报告。

熔融琼脂：高压灭菌后如不立即使用，LB琼脂可在50–55°C水浴中保温数小时。长时间在较高温度下保温可能导致热敏感成分降解；不建议对已高压灭菌的培养基进行再次灭菌。

质量控制与问题排查

质量控制检查：

• 无菌性验证：将2–3个未接种培养皿置于37°C培养24–48小时，应无菌落生长。
• 促生长能力验证：将已知大肠杆菌菌株（如DH5α）接种于培养皿，37°C过夜培养，预期结果为生长旺盛、分离良好的菌落。
• pH验证：高压灭菌前用校准好的pH计检测溶解后琼脂溶液的pH，应为25°C时7.0 ± 0.2。

常见问题及解决方案：