实验方案（Protocols）

B 细胞的活化

· · 发布于 2024年12月24日 · 更新于 2024年12月24日 ·

简介

B 细胞在特异性抗原、抗 Ig 抗体和（或）促有丝分裂原等的激活后，可发生活化、增殖。

原理

B 细胞活化的基本原理是在特异性抗原、抗 Ig 抗体和（或）促有丝分裂原等的激活后，可发生活化、增殖。

操作方法

B细胞活化

材料与仪器

试剂：
（1）纯化的 B 细胞。
（2）抗 IgM 抗体、细菌 LPS（E．coli；Difco＃011B4）。
（3）可溶性 CD40L、抗鼠或人 CD40 抗体。
（4）含 10％ FCS 的 RPMI 1640 培养液。
仪器：
（1）48 孔平地培养板，
（2）流式细胞仪

步骤

B 细胞活化的基本过程可分为以下几步：

（1）纯化的 B 细胞，用含 10％ FCS 的 RPMI 1640培养液调整 B 细胞浓度为 10／ml。

（2）向 48 孔平底培养板中加入1ml B 细胞悬液，即 1x10／孔。

（3）向 B 细胞悬液中加入下列刺激物之一，每个条件设 3 个复孔：

1）抗 IgM 抗体，2～200μg／ml；

2）LPS, 1~100μg/ml;

3）sCD40L, 0.03~0.1μg/ml;

4）抗 CD40 抗体，0.2～0.5μg／ml；

5）不加任何刺激剂，阴性对照。

（4）将培养板置于 37℃、5％ CO₂ 细胞培养箱中培养 24～72 小时，即可得到活化的 B 细胞。

（5）收集 B 细胞，用 FACS 法表面标记活化 B 细胞的表面分子，如 MHC II 类分子、CD80 和 CD86 等的表达。

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探索主题：免疫学实验

Da — 若无特别说明，分子量单位默认为道尔顿。 Mw — 重均分子量。 Mn — 数均分子量。

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阿拉丁科学.《B 细胞的活化》. 阿拉丁知识库，更新于 2024年12月23日。
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