实验方案(Protocols)

分光光度计测定溶液的吸光值

简介

测吸光值

原理

蛋白质纯化实验中,将会测定 b-glucuronidase (GUS) 的活性,是利用 p-nitrophenyl b-D-glucuronide 为基质,加入酵素反应后所释出之 p-nitrophenol 在碱性下呈现黄色,可测定 415 nm 之吸光度,利用 Beers Law 即可计算求得反应物之生成量。 本实验将利用已知浓度之 p-nitrophenol,测定其 A415,以求取 p-nitrophenol 在 GUS 活性测定条件下之 消光系数 (extinction coefficient)。

应用

含量测定

操作方法

分光光度计测定溶液的吸光值

材料与仪器

【材料】p-Nitrophenol10×GUS assay buffer (0.5 M Na phosphate, pH 7.0; 1% Triton X-100; 0.1 Mβ-mercaptoethanol)GUS 终止液 (2.5 M 2-amino 2-methyl propanediol, 溶于水中, pH 11)

步骤

1) 配制5 mM p-nitrophenol stock solution: 秤取 _____ mg p-nitrophenol,置于400 mL 烧杯中,加入25 mL 10×GUS assay buffer,加水至约200 mL,搅拌溶解后,加水至250 mL 并混合均匀。请配制三份。2) 配制50 μM p-nitrophenol 溶液:分别由三份stock solution 取适量以1×GUSassay buffer 稀释之。3) 取1 mL 50 μM p-nitrophenol溶液于试管中,加入0.4 mL 2.5 M 2-amino2-methyl propanediol溶液,混合均匀后测定A415. 另取1 mL 1×GUS assaybuffer,加入0.4 mL 2.5 M 2-amino 2-methyl propanediol溶液,混合均匀,亦测定A415,以作为blank.4) 由Beer's Law 求出p-nitrophenol 在此测定条件下之消光系数。


如需了解更多产品详情,请前往阿拉丁官网查询。

https://www.aladdin-e.com

目录: 实验方案(Protocols)
探索主题: 生物化学实验

Da — 若无特别说明,分子量单位默认为道尔顿。   Mw — 重均分子量。   Mn — 数均分子量。

产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。

引用本文

阿拉丁科学.《分光光度计测定溶液的吸光值》. 阿拉丁知识库,更新于 2024年12月23日。 https://www.aladdin-e.com/zh_cn/faqs/determination-of-absorbance-values-of-so.html