测吸光值

原理

应用

含量测定

操作方法

分光光度计测定溶液的吸光值

材料与仪器

【材料】p-Nitrophenol10×GUS assay buffer （0.5 M Na phosphate, pH 7.0; 1% Triton X-100; 0.1 Mβ-mercaptoethanol）GUS 终止液 （2.5 M 2-amino 2-methyl propanediol, 溶于水中， pH 11）

步骤

1） 配制5 mM p-nitrophenol stock solution: 秤取 _____ mg p-nitrophenol,置于400 mL 烧杯中，加入25 mL 10×GUS assay buffer,加水至约200 mL,搅拌溶解后，加水至250 mL 并混合均匀。请配制三份。2） 配制50 μM p-nitrophenol 溶液：分别由三份stock solution 取适量以1×GUSassay buffer 稀释之。3） 取1 mL 50 μM p-nitrophenol溶液于试管中，加入0.4 mL 2.5 M 2-amino2-methyl propanediol溶液，混合均匀后测定A415. 另取1 mL 1×GUS assaybuffer,加入0.4 mL 2.5 M 2-amino 2-methyl propanediol溶液，混合均匀，亦测定A415,以作为blank.4） 由Beer's Law 求出p-nitrophenol 在此测定条件下之消光系数。

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