本品是针对培养细胞设计的一种快速、便捷型的线粒体分离试剂，分离的线粒体纯度较高，绝大部分都含有完整的内膜和外膜，可用于线粒体内、外膜完整性等生理功能等方面的研究。
使用说明：
1、试剂准备
1.1 准备溶液：室温融解溶液，溶解后立即置于冰上并混匀。
1.2 线粒体分离试剂：用等体积的蒸馏水将2×线粒体分离试剂稀释为1×线粒体分离试剂。
2、细胞准备
2.1 收集细胞：
对于贴壁细胞：用PBS洗一遍，用胰酶细胞消化液消化细胞，离心收集细胞；
对于悬浮细胞：直接离心收集细胞。
2.2 洗涤细胞：用预冷的PBS轻轻重悬细胞沉淀，取少量细胞用于计数，剩余细胞600g，4°C 离心5min沉淀细胞。弃上清。
3、细胞匀浆及匀浆效果鉴定
3.1 在2~5×10⁷细胞中，加入1~2.5mL线粒体分离试剂，轻轻悬浮细胞，冰浴放置10-15min。
3.2 把细胞悬液转移到适当大小的玻璃匀浆器中，匀浆10-30下左右。
3.3 通常可在匀浆10次后取约2µL细胞匀浆，稀释20倍后加入台盼蓝染色液，混匀后显微镜下观察台盼蓝染色阳性(蓝色)细胞的比例。如果阳性细胞比例不足50%，增加5次匀浆。随后再同前取样进行台盼蓝染色鉴定。当阳性比例超过50%时即可停止匀浆进入下一步。
4、线粒体的收集
4.1 把细胞匀浆在600g，4°C离心10min。
注：如需获得纯度更高的线粒体，可以将此步骤的离心速度改为1000g，其它离心条件不变；获得更高纯度线粒体的缺点是相同数量细胞的线粒体抽提得率会下降。
4.2 小心把上清转移到另一离心管中，在11000g，4°C离心10min。
注：如需获得纯度更高的线粒体，可以将此步骤的离心速度改为3500g，其它离心条件不变；获得更高纯度线粒体的缺点是相同数量细胞的线粒体抽提得率会下降。
4.3 小心去除上清。沉淀即为分离得到的细胞线粒体。
注：如果希望获得去除线粒体的细胞浆蛋白，在本步骤，收集上清，并在收集上清时注意勿触及沉淀。随后把收集的上清12000g，4°C离心10min。取上清即为去除线粒体的细胞浆蛋白。
注意事项：
1、试剂盒不提供PBS、BCA蛋白定量试剂盒。
2、如果不用于制备线粒体蛋白样品，线粒体分离试剂和线粒体裂解液中不必加入蛋白酶抑制剂或PMSF。反之，如果用于制备线粒体蛋白样品，需在线粒体分离试剂和线粒体裂解液中加入蛋白酶抑制剂或PMSF。
3、分离线粒体的所有步骤均在冰上或4°C进行，所用溶液需冰浴或4°C预冷。
4、通常在分离线粒体时前后两次离心速度选取600g和11,000g，如果希望纯度更高，但对线粒体的得率要求不高，前后两次离心速度可以采用1000g和3500g。
5、对于大量制备，可根据细胞数，按比例放大所使用的试剂。
6、为了您的自身安全，使用试剂前，请做好防护，如穿实验服，带手套等。

规格

产品名称

线粒体分离试剂

规格或纯度

2×

分子类型

生物试剂/缓冲液

产品线

生物产品

储存与运输

物理形态

液体

浓度

2×

储存条件

-20°C储存

运输条件

超低温运输

稳定性与储存

Store at -20℃ long term (12 months). Upon receipt, it is recommended to aliquot. Avoid freeze/thaw cycle. Desiccated.

技术文档

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ZJ25F0622441	分析证书	M752149
ZJ25F0723649	分析证书	M752149

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