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多糖多酚植物总RNA提取试剂盒 (DNase I)
有货
为什么选择此级别
BioReagent,分子生物学级 ，适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。
储存与运输
2-8°C储存,室温。低温运输 。请查阅批次 COA 获取详细规格。
质量文档
SDS、COA、产品数据表及规格说明书均可下载。可通过批号查询获取批次 COA。
文献证明
在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。
概述
本试剂盒采用了独特的裂解系统，可以对各种简单的植物组织材料（叶片、茎、幼苗等），尤其是富含多糖多酚的植物组织材料（果实、种子等）、真菌等进行RNA的提取，适用范围广泛。使用本试剂盒可以有效提取分子量大于200nt的RNA。
本试剂盒具有高效、快速、方便的特点，提取过程中也无需苯酚氯仿抽提等步骤。利用该试剂盒提取的RNA纯度高，极少含蛋白质、基因组DNA和其他杂质的污染。使用本试剂盒可以从50-100 mg植物组织中纯化得到多至几十微克的高纯度RNA。提取得到的RNA可以直接用于Northern杂交、斑点杂交、mRNA纯化、体外翻译、RNA分解酶的保护分析、RT-PCR、RealTime RT-PCR和构建cDNA文库等各种分子生物学实验。
本产品适用样本举例（多糖多酚类样本）
果实样本：红夏橙幼果、苹果原生质细胞、香蕉、西瓜、苹果、葡萄果肉及果皮、梨。
叶片样本：棉花叶片、木薯叶片、东南景天叶片、葡萄叶片、甜瓜叶片、绿豆叶片、水稻叶片、大豆叶片、白松松针、大麦叶片、平邑甜茶、萼脊兰叶片、野生刺山柑叶片、牛樟叶、白花蛇舌草。
根/茎样本：油菜根、马铃薯、红薯、烟草茎、大麦根牛樟根、茎。
种子样本：棉花种胚、荞麦种子、红夏橙种子。
中草药样本：五味子（果实）。
真菌样本：香菇（真菌和固体培养基）、破囊壶菌、板栗疫病菌。
藻类样本：长茎葡萄蕨藻。
器官类样本：月季愈伤组织、草莓组培苗。
预防RNase污染，应注意以下几方面
1. 经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase污染。
2. 使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染。
3. RNA在Buffer PRL中时不会被RNase降解，但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料 和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4 h，塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10 min，然后用水彻底清洗，再灭菌，即可去除RNase。
4. 配制溶液应使用RNase-Free ddH₂O。
注意事项
1. 操作前在Buffer PRL中加入β-巯基乙醇至终浓度5%，如475 μL Buffer PRL中加入25 μL β-巯基乙醇。此裂解液最好现用现配。配好的PRL可在2-8℃放置1个月。
2. 尽可能使用新鲜收集的样品，RNA产量与起始样品中RNA的完整性有关，按照说明书标准流程降解为小片段的RNA不能被有效回收。
3. 第一次使用前应在漂洗液Buffer RW2中加入48 mL的无水乙醇。
4. DNase I储存液的配制：用1 mL注射器将550 μL RNase-Free ddH₂O注入装有DNase I干粉的瓶 中，轻柔混匀至溶解，分装后-20℃储存（可保存9个月），每次根据用量需求取出。配制的 DNase I工作液置于2-8℃储存（可保存42天），避免反复冻融。
操作步骤
使用前准备：在 Buffer RW2 中加入48 mL的无水乙醇。
1. 匀浆处理
称取 50–100 mg 新鲜植物组织或冻存的植物组织，在液氮中迅速研磨成粉末。在 1.5 mL 离心管中加入 500 μL Buffer PRL（使用前请先加入 β-巯基乙醇），立即剧烈涡旋振荡 30 秒，使其充分混匀裂解。14,000 rpm（18,630 × g）离心 2 分钟。
注意 1：对于预期 RNA 得率小于 10 μg 的植物样本，请使用 100 mg 的起始样本量；对于富含淀粉的样本或成熟叶片，请将 Buffer PRL 用量增加至 700 μL。
注意 2：由于植物多样性非常丰富，而且同种植物的不同生长发育阶段和不同组织的 RNA 含量都不相同，请根据具体实验情况选择合适的植物材料用量。
2. 将上清液转移至过滤柱 GS（过滤柱放在收集管中），14,000 rpm（18,630 × g）离心 30 秒。小心吸取收集管中的上清至新的 RNase-Free 离心管中，吸头尽量避免接触收集管中的细胞碎片沉淀。
3. 缓慢加入 0.4 倍上清体积的 Buffer RBE（此时可能会出现沉淀或絮状物，属正常现象），混匀。将混合液转移至吸附柱 RA（吸附柱放在收集管中），12,000 rpm（13,680 × g）离心 30 秒。弃废液，将吸附柱放回收集管中。
4. 向吸附柱中加入 350 μL Buffer RW，12,000 rpm（13,680 × g）离心 30 秒。弃废液，将吸附柱放回收集管中。
5. 配制DNase I 工作液：取 10 μL DNase I 储存液放入新的 1.5 mL RNase-Free 离心管中。加入 70 μL DNase I Buffer，轻柔混匀，得到DNase I 工作液。
6. 向吸附柱中央加入 80 μL 的 DNase I 工作液，室温放置 15 分钟。
7. 向吸附柱中加入 350 μL Buffer RW，12,000 rpm（13,680 × g）离心 30 秒。弃废液，将吸附柱放回收集管中。
8. 向吸附柱中加入 500 μL Buffer RW2（使用前请先加入无水乙醇），12,000 rpm（13,680 × g）离心 30 秒。弃废液，将吸附柱放回收集管中。
9. 重复步骤 8。
10. 12,000 rpm（13,680 × g）离心 2 分钟。
11. 将吸附柱转移至一个新的 1.5 mL RNase-Free 离心管中，打开吸附柱管盖，室温放置 1 分钟，以彻底晾干吸附柱中的无水乙醇。向吸附膜的中间部位悬空滴加 30–100 μL RNase-Free ddH₂O，12,000 rpm（13,680 × g）离心 30 秒。得到的 RNA 可直接用于下游实验，或于 -80℃ 以下保存。
注意：RNase-Free ddH₂O 体积不应小于 30 μL，体积过小会影响回收率。若要提高 RNA 的产量，可将第一次洗脱液重新加入吸附柱进行洗脱，或将 RNase-Free ddH₂O 置于 65℃ 预热。
This kit utilizes a unique lysis system suitable for RNA extraction from various simple plant tissues (leaves, stems, seedlings, etc.), especially plant tissues rich in polysaccharides and polyphenols (fruits, seeds, etc.), as well as fungi. It has a wide range of applications. Using this kit, RNA larger than 200 nt can be efficiently extracted.
This kit is highly efficient, rapid, and convenient. The extraction process does not require phenol‑chloroform extraction. The RNA purified with this kit is of high purity, with minimal contamination from proteins, genomic DNA, and other impurities. Using this kit, dozens of micrograms of high‑purity RNA can be purified from 50–100 mg of plant material. The extracted RNA can be directly used in various molecular biology experiments, including Northern blot, dot blot, mRNA purification, in vitro translation, RNase protection assay, RT‑PCR, real‑time RT‑PCR, and cDNA library construction.
Examples of Applicable Samples (Polysaccharide/Polyphenol‑Rich Samples)
Fruit samples: Young fruit of red summer orange, apple protoplast cells, banana, watermelon, apple, grape flesh and peel, pear.
Leaf samples: Cotton leaf, cassava leaf, Sedum alfredii leaf, grape leaf, melon leaf, mung bean leaf, rice leaf, soybean leaf, white pine needle, barley leaf, Malus hupehensis, Cymbidium ensifolium leaf, wild caper leaf, stout camphor tree leaf, Hedyotis diffusa.
Root/stem samples: Rape root, potato, sweet potato, tobacco stem, barley root, stout camphor tree root, stem.
Seed samples: Cotton seed embryo, buckwheat seed, red summer orange seed.
Chinese herbal medicine sample: Schisandra (fruit).
Fungus samples: Shiitake mushroom (fungus and solid culture medium), Thraustochytrium, chestnut blight fungus.
Algae sample: Caulerpa lentillifera.
Organ‑type samples: Rose callus, strawberry tissue culture seedling.
Preventing RNase Contamination
Change gloves frequently. Skin often carries bacteria that may cause RNase contamination.
Use RNase‑free plasticware and tips to avoid cross‑contamination.
RNA is not degraded by RNase when in Buffer PRL, but during subsequent processing, use RNase‑free plastic and glassware. Glassware can be baked at 150°C for 4 hours; plasticware can be soaked in 0.5 M NaOH for 10 minutes, then thoroughly rinsed with water and sterilized to remove RNase.
Use RNase‑Free ddH₂O to prepare solutions.
Precautions
Before operation, add β‑mercaptoethanol to Buffer PRL to a final concentration of 5%, e.g., add 25 μL β‑mercaptoethanol to 475 μL Buffer PRL. This lysis buffer is best prepared fresh. The prepared PRL can be stored at 2‑8°C for 1 month.
Use freshly collected samples whenever possible. RNA yield depends on the integrity of the RNA in the starting material. RNA degraded into small fragments following the standard protocol cannot be efficiently recovered.
Before first use, add 48 mL of absolute ethanol to Buffer RW2.
Preparation of DNase I stock solution: Use a 1 mL syringe to inject 550 μL RNase‑Free ddH₂O into the vial containing DNase I powder. Gently mix until dissolved, aliquot, and store at ‑20°C (can be stored for 9 months). Thaw aliquots as needed. The prepared DNase I working solution can be stored at 2‑8°C for 42 days. Avoid repeated freeze‑thaw cycles.
Protocol
Preparation before use: Add 48 mL of absolute ethanol to Buffer RW2.
1. Homogenization
Weigh 50–100 mg of fresh or frozen plant tissue. Rapidly grind into powder in liquid nitrogen. Transfer to a 1.5 mL centrifuge tube containing 500 μL Buffer PRL (add β‑mercaptoethanol before use). Immediately vortex vigorously for 30 seconds to lyse thoroughly. Centrifuge at 14,000 rpm (18,630 × g) for 2 minutes.
Note 1: For plant samples expected to yield less than 10 μg RNA, use 100 mg starting material. For starch‑rich samples or mature leaves, increase the volume of Buffer PRL to 700 μL.
Note 2: Because plant diversity is very high, and RNA content varies among different growth stages and tissues of the same plant, adjust the amount of plant material according to the specific experiment.
2. Transfer the supernatant to a Filter Column GS (placed in a collection tube). Centrifuge at 14,000 rpm (18,630 × g) for 30 seconds. Carefully transfer the supernatant from the collection tube to a new RNase‑Free centrifuge tube. Avoid touching the pellet of cell debris with the pipette tip.
3. Slowly add 0.4 volumes of Buffer RBE (relative to the supernatant volume). Precipitation or flocculent material may appear – this is normal. Mix well. Transfer the mixture to a Spin Column RA (placed in a collection tube). Centrifuge at 12,000 rpm (13,680 × g) for 30 seconds. Discard the flow‑through and place the column back into the collection tube.
4. Add 350 μL Buffer RW to the column. Centrifuge at 12,000 rpm (13,680 × g) for 30 seconds. Discard the flow‑through and return the column to the collection tube.
5. Preparation of DNase I working solution: Take 10 μL of DNase I stock solution into a new 1.5 mL RNase-Free centrifuge tube. Add 70 μL of DNase I Buffer, mix gently to obtain the DNase I working solution.
6. Add 80 μL of the DNase I working solution to the center of the column. Let stand at room temperature for 15 minutes.
7. Add 350 μL Buffer RW to the column. Centrifuge at 12,000 rpm (13,680 × g) for 30 seconds. Discard the flow‑through and return the column to the collection tube.
8. Add 500 μL Buffer RW2 (ensure absolute ethanol has been added before use) to the column. Centrifuge at 12,000 rpm (13,680 × g) for 30 seconds. Discard the flow‑through and return the column to the collection tube.
9. Repeat step 8.
10. Centrifuge at 12,000 rpm (13,680 × g) for 2 minutes.
11. Transfer the column to a new 1.5 mL RNase‑Free centrifuge tube. Open the lid and let stand at room temperature for 1 minute to completely air‑dry any residual ethanol. Add 30–100 μL RNase‑Free ddH₂O to the center of the membrane without touching it. Let stand for 2 minutes at room temperature, then centrifuge at 12,000 rpm (13,680 × g) for 30 seconds. The obtained RNA can be used directly in downstream experiments or stored below ‑80°C.
Note: The volume of RNase‑Free ddH₂O should not be less than 30 μL; smaller volumes will reduce recovery. To increase RNA yield, reload the first eluate onto the column for a second elution, or preheat the RNase‑Free ddH₂O to 65°C.
规格
规格或纯度
BioReagent,分子生物学级
英文名称
Polysaccharide & Polyphenol Rich Plants Total RNA Extraction Kit (DNase I)
应用
RNA Extraction
样品类型
植物
储存与运输
储存条件
2-8°C储存,室温
运输条件
低温运输
稳定性与储存
各组分在相应的储存条件下保质期15个月。
组分与储存
P1522757 | Component | 50T | Storage |
P1522757A | Buffer PRL | 28 mL | RT. |
P1522757B | Buffer RBE | 20 mL | RT. |
P1522757C | Buffer RW | 38 mL | RT. |
P1522757D | Buffer RW2 | 12 mL | RT. |
P1522757E | RNase-Free ddH₂O | 15 mL | RT. |
P1522757F | 过滤柱GS (含2mL收集管) | 1 EA×50 | RT. |
P1522757G | 吸附柱RA (含2mL收集管) | 1 EA×50 ) | RT. |
P1522757H | RNase-Free 离心管 (1.5mL) | 1 EA×50 | RT. |
P1522757I | 1mL 注射器 | 1 EA | RT. |
P1522757J | DNase I | 1 EA | 2-8℃. |
P1522757K | DNase I Buffer | 4 mL | 2-8℃. |
P1522757L | RNase-Free ddH₂O | 1 mL | 2-8℃. |
P1522757 A-I: 室温保存，15个月。
P1522757 J-L：2-8℃保存，15个月。
加入β-巯基乙醇的Buffer PRL可在2-8℃放置1个月。
技术文档
高级数据
质检证书（CoA,COO,BSE/TSE 和分析图谱)
C of A & Other Certificates(BSE/TSE, COO):
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| 批号(Lot Number) | 证书类型 | 货号 |
|---|---|---|
 ZJ26F0636850 |
分析证书 | P1522757 |
技术文档和文章
溶液计算器
常见问题
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「分子生物学级」表示该产品经过加工和检测，适用于分子生物学和蛋白质组学。典型规格包括：低或不可检测的核酸酶/蛋白酶活性、低内毒素、受控的微生物限度，以及高批间重现性。
什么是「BioReagent」？
「BioReagent」表示该产品经过加工和检测，适用于生物和生化应用。规格可能包括内毒素限值、微生物控制、无菌性、低 DNase/RNase/蛋白酶活性，以及在相关情况下的生物活性验证。
本产品应如何储存？
请于2–8 °C条件下保存。需冷藏保存以维持规定的有效期。
本产品如何运输？
本产品采用湿冰冷藏运输。收货后请立即拆包，并按上述储存条件保存。
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