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在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。
PTAD-叠氮化物(4-(4-(2-叠氮乙氧基)苯基)-1,2,4-三唑烷-3,5-二酮)是1,2,4-三唑烷-3,5-二酮衍生物。它可以由肼基甲酸乙酯制备。
应用
PTAD-叠氮化物可用于制备4-(4-(2-叠氮乙氧基)苯基)-3H-1,2,4-三唑-3,5(4H)-二酮和aplaviroc-尿唑。 最近,通过电化学酪氨酸点击(e-Y-CLICK)化学在肽和蛋白质的无痕化学选择性标记中证明了这种尿唑。
PTAD-叠氮化物是一种选择性交联剂,其一端用于与酪氨酸反应,另一端用于呈现叠氮化物。与酪氨酸生物偶联后,叠氮化物可以通过Cu(I)催化的点击化学反应与炔烃反应,或者在无铜反应中与环辛炔反应。已显示该试剂可选择性地将聚乙二醇或PEG链引入具有表面暴露的酪氨酸残基的蛋白质上。PTAD-叠氮化物也已用于抗体-药物偶联物的形成。本试剂与PBS、Tris及混合PBS/Tris缓冲液(首选)等不同缓冲系统相容。已显示与酪氨酸的连接对pH值和极端温度以及血浆稳定。
注意
必须首先通过与1,3-二溴-5,5-二甲基海因(产品#157902)以1:0.98摩尔比搅拌来激活PTAD-叠氮化物。当溶液颜色从无色变为深红色时,活化很明显,且应立即使用活化试剂。
用PTAD修饰蛋白的一般程序。
第1部分:PTAD激活
在有机溶剂(首选溶剂为DMF或乙腈,避免使用DMSO)中将1:0.98摩尔当量的未活化PTAD与1,3-二溴-5,5-二甲基海因(产品#157902)混合在一起
观察到颜色从无色/浅黄色变为深红色(混合约5分钟)。
溶液变红后,将现已活化的试剂储存在冰上,并在30分钟内用于蛋白修饰。
第2部分:蛋白修饰
将混合磷酸盐/Tris缓冲液或Tris缓冲液(pH值应为6-9)中的蛋白溶液添加到含有上述制备的活化PTAD试剂的eppendorf管(或其他小瓶)中,并在室温下轻轻混合30分钟。优选使用相对于蛋白10倍摩尔过量的试剂。使用最小值浓度为1mg/ml的蛋白(增强标记首选较高浓度)。
通过凝胶过滤去除过量的未反应的PTAD。
PTAD-Azide (4-(4-(2-Azidoethoxy)phenyl)-1,2,4-triazolidine-3,5-dione) is a 1,2,4-triazolidine-3,5-dione derivative. It can be prepared from ethyl hydrazinecarboxylate.
Note
PTAD-Azide must be first activated by stirring in a 1:0.98 molar ratio with 1,3-dibromo-5,5-dimethylhydantoin (product # 157902). Activation is evident upon solution color change from colorless to deep red and the activated reagent should be used immediately.
General Procedure for Protein Modification with PTAD.
Part 1: PTAD activation
Mix together 1:0.98 molar equivalents of unactivated PTAD to 1,3-dibromo-5,5-dimethylhydantoin (product # 157902) in organic solvent (preferred solvents are DMF or acetonitrile, avoid using DMSO)
Color change is observed from colorless/pale yellow to deep red (approximately 5 min of mixing).
After the solution turns red, store the now activated reagent on ice and use for protein modification within 30 min.
Part 2: Protein modification
Add protein solution in mixed phosphate/Tris buffer or Tris buffer (pH should be 6 - 9) to the eppendorf tube (or other vial) containing the activated PTAD reagent prepared above and mix gently at room temperature for up to 30 min. Preferably use 10-fold molar excess of reagent relative to protein. Use protein at a minimum concentration of 1 mg/ml (higher concentrations are preferred for enhanced labeling).
Remove excess unreacted PTAD by gel filtration.
PTAD-Azide may be used in the preparation of 4-(4-(2-azidoethoxy)phenyl)-3H-1,2,4-triazole-3,5(4H)-dione and aplaviroc-urazole.This urazole was recently demonstrated in the traceless, chemoselective labeling of peptides and proteins through electrochemical tyrosine-click (e-Y-CLICK) chemistry.