阿拉丁生产的Poly(U) Polymerase，即Poly(U)聚合酶，也称PolyU Polymerase或PolyU聚合酶，简称PUP，是由阿拉丁自主研发的PerfectProtein™技术平台表达、纯化获得的重组聚合酶。Poly(U) Polymerase能以不依赖模板的方式将来自UTP的UMP整合到底物RNA的3'末端，形成poly(U)尾；也可以不依赖模板的方式将来自ATP的AMP整合到底物RNA的3'末端，形成poly(A)尾，但该酶形成poly(U)尾的能力比形成poly(A)尾的能力强得多。如果反应中使用生物素等标记的UTP，则可实现对RNA的3'末端的生物素标记等1]。阿拉丁Poly(U) Polymerase对RNA 3'末端加Poly(U)尾的效果参考图1。图1.阿拉丁Poly(U) Polymerase 和国外N公司的同类产品(Competitor)对RNA 3'末端加Poly(U)尾的效果图。在25µl反应体系中加入图中指定量的本产品或N公司的Poly(U) Polymerase，37ºC孵育1小时进行反应，65ºC加热20分钟进行失活，反应完毕后加入2X RNA Loading Buffer ("R0215', ")，95ºC孵育3分钟进行变性，随后进行尿素变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。如图所示，本产品与N公司的产品相比，具有类似的对RNA 3'末端加Poly(U)尾的效果。反应体系(25μl)：50mM NaCl, 10mM Tris-HCl, 10mM MgCl2, 1mM DTT, pH7.9 @ 25ºC, 0.5mM UTP，人工合成的80pmol的16nt长度的RNA以及不同浓度的Poly(U) Polymerase。实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

用途：

RNA 3'端加Poly(U)尾或Poly(A)尾，然后用于克隆；用生物素或荧光修饰的UTP标记RNA；放射性标记RNA；对3'末端为2'氧甲基的RNA进行Poly(A)加尾；对进入真核细胞的RNA加尾从而研究其对RNA稳定性和翻译的影响。

来源：

由大肠杆菌表达，表达基因为来自Schizosaccharomyces pombe Poly(U) Polymerase基因。

酶储存溶液：

10mM Tris-HCl (pH7.5 @ 25ºC), 100mM NaCl, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 50% (v/v) Glycerol.

失活或抑制：

65ºC加热20分钟可使Poly(U) Polymerase失活。10X Poly(U) Reaction Buffer：500mM NaCl, 100mM Tris-HCl, 100mM MgCl2, 10mM DTT, pH7.9 @ 25ºC.'],

注意事项：

10X Poly(U) Reaction Buffer中不包含UTP。Poly(U) Polymerase的用量主要影响目的产物的长度，可以根据所需目的产物的长度适当调整酶的用量，如果想得到长度较长的产物可以适当加大酶的用量或延长反应时间。本产品中在使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20ºC保存。超纯水推荐使用 Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) 。本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：

1.使用Poly(U) Polymerase对RNA 3'端加Poly(U)尾。a.参考下表在冰浴中配制反应体系。 Component Volume Ultrapure Water 18.45µl 10X Poly(U) Reaction Buffer 2.5µl Single-stranded RNA (100µM) 0.8µl UTP (10mM) 1.25µl RNase Inhibitor 1µl Poly(U) Polymerase (2U/µl) 1µl 注：请把除Poly(U) Polymerase以外的组分充分混匀后再加入Poly(U) Polymerase，加入Poly(U) Polymerase后可以用枪吹打或轻轻Vortex混匀。b.反应条件：37ºC孵育1小时。c.终止反应：65ºC孵育20分钟并加入2X RNA Loading Buffer 。2.其它应用请参考相关文献进行。参考文献：1.Kwak J E, Wickens M. RNA. 2007. 13(6).

规格

产品名称

Poly(U)聚合酶

别名

Poly(U)聚合酶 | PolyU 聚合酶

英文别名

PolyU Polymerase | PUP

规格或纯度

ActiBioPure™, 生物活性, EnzymoPure™, 无动物源, 无载体, 无菌, 无DNA酶和RNA酶, 2.0 U/µL

生化机理

Cytoplasmic uridylyltransferase that mediates the terminal uridylation of mRNAs with short poly(A) tails such as such as act1, hcn1 and urg1 mRNAs, hence facilitating global mRNA decay.Uridylates the 3' ends of actin mRNAs upon S-phase arrest. Has also a weak poly(A) polymerase (PAP) activity. Residue His-336 is responsible for the specificity for UTP. Involved in cell cycle arrest where in association with crb2/rhp9 and chk1 it inhibits unscheduled mitosis (PubMed:10757807).

生物活性

One unit is defined as the amount of enzyme that incorporates 1nmol of UMP into RNA in a 50μl volume in 10 minutes at 37ºC.

表达系统

E. coli

种属

粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)

无载体

Yes

无动物源

Yes

分子类型

酶

产品线

生物产品

储存与运输

物理形态

液体

储存缓冲液

10mM Tris-HCl, 100mM NaCl, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 50%(v/v) Glycerol, pH7.5

浓度

2.0 U/µL

储存条件

-20°C储存,避免反复冻融

运输条件

超低温运输

稳定性与储存

Store at -20°C long term (24 months). Upon delivery aliquot. Avoid freeze/thaw cycle.

单位定义

One unit is defined as the amount of enzyme that incorporates 1nmol of UMP into RNA in a 50μl volume in 10 minutes at 37ºC.

高级数据

质检证书(CoA,COO,BSE/TSE 和分析图谱)

C of A & Other Certificates(BSE/TSE, COO):

输入批号以搜索分析图谱:

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批号(Lot Number)	证书类型	货号
ZJ25F0622150	分析证书	P749187
ZJ25F0622149	分析证书	P749187
ZJ25F0622148	分析证书	P749187

技术文档和文章

p749187_poly(u)聚合酶产品说明书.pdf

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