Anstart Taq-D qPCR Master Mix (2×, with UDG) 为一管式探针法 qPCR 专用预混液，适用于 DNA 单重或多重项目的荧光定量 PCR 检测。本产品提供了进行简便、灵敏和防污染的 PCR 检测系统，适用于快速实时荧光 PCR 程序，可在 35-40 分钟内完成扩增。
核心试剂包含了 dNTPs Mix（包含 dATP、dTTP、dCTP、dGTP、dUTP等5种碱基)、双抗体修饰热启动酶（Anstart Taq DNA polymerase-D）、UDG 酶（Uracil-DNAGlycosylase），使用者只需加入适量的引物和探针或荧光染料及模板，即可进行荧光 PCR检测。
UDG 的作用原理：在 PCR 反应前 50℃、2min 反应中，UDG 酶可水解 PCR 反应液中含有尿嘧啶的 PCR 产物的尿嘧啶碱基和糖磷酸骨架的N-糖苷键，释放游离尿嘧啶。随后进行95℃、2.5min 热处理，在 UDG 酶失活的同时进一步对磷酸骨架水解，从而消除含有尿嘧啶的 PCR 产物的污染。UDG 酶可以作用于单链或双链 DNA，对 RNA 无活性。
产品号 | 组分 | 100T | 500T | 5000T | 存储温度 | P751573 | UltraBio™ Anstart Taq-D qPCR Master Mix | 1.25 mL | 5×1.25mL | 50×1.25mL | -20℃ |
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适用仪器
1、本试剂适用于 ABI 7500、Qiagen QiaQuant 5-plex。
2、其它未列出机型，为本试剂尚未针对进行或未完成相关实验。如用户需要利用这类仪器平台开展本试剂检测工作，请与我公司技术支持部门联系后获得相关支持。
使用说明
1、试剂准备（试剂准备区）
1.1 从-20±5℃冰箱中取出试剂平衡至室温，待完全溶解后震荡混匀并低速离心 15s 待用。建议将 PCR 液体分装使用，避免反复冻融。
1.2 参照下表配制 PCR 反应体系：
组分
| 加入体积/25μL
| 加入体积/50μL
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2× Anstart Taq-D qPCR Master Mix
| 12.5 μL
| 25 μL
|
Primer-probe Mix
| 1 μL
| 2 μL
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Templates
| 5 μL
| 10 μL
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ddH2O
| Up to 25 μL
| Up to 50 μL
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Total
| 25 μL
| 50 μL
|
注 1：引物以及模板的用量可自行调整
注 2：使用快速反应程序时，建议将反应体系总体积设置为 25 μL
1.3 用移液器轻轻吹打混匀或轻微 Vortex 混匀，室温离心数秒，使液体聚于管底。
1.4 将各 PCR反应管置于设置好的 PCR仪上，开始 PCR 反应。
2、样本准备（样本准备区）
根据需要加入相应的样本。
3、PCR 扩增（核酸扩增区）
3.1 开机预热并检验仪器性能。
3.2 取样本准备区准备好的 PCR 反应管，放置在仪器样品槽相应位置，并记录放置顺序。根据需求设置荧光通道。
3.3 建议反应程序：
PCR 扩增参数参考（普通程序）
程序
| 循环数
| 温度
| 恒温时间
| 采样模式
|
| 1 | 1 | 50℃
| 2min
| 无
|
| 2 | 1 | 95℃
| 2min 30s
| 无
|
| 3 | 45 | 94℃
| 10s
| 无
|
| 4 | 45
| 55℃
| 40s
| 采集荧光
|
| 5 | 1 | 25℃
| 10s
| 无
|
PCR 扩增参数参考（快速程序）
程序
| 循环数
| 温度
| 恒温时间
| 采样模式
|
| 1 | 1 | 50℃
| 2min
| 无
|
| 2 | 1 | 95℃
| 30s
| 无
|
| 3 | 45 | 94℃
| 5s
| 无
|
| 4 | 45
| 55℃
| 15s
| 采集荧光
|
| 5 | 1 | 25℃
| 10s
| 无 |
注：收集荧光设置为两步或者三步可以根据您的实验设置自行设定。通常各引物使用的终浓度为 0.2 μM，引物的 Tm 值一般设定在 55℃以上，可借助相关软件进行分析，使用理想的引物浓度和退火温度可以得到理想的反映效果。
The Anstart Taq-D qPCR Master Mix (2×, with UDG) is a ready-to-use, probe-based qPCR master mix designed for sensitive and contamination-resistant fluorescence quantitative PCR detection in single or multiplex DNA targets. This product provides a simple, rapid, and highly sensitive PCR detection system, enabling real-time fluorescence PCR amplification in 35–40 minutes.
Catalog | Component | 100T | 500T | 5000T | Storage | P751573 | UltraBio™ Anstart Taq-D qPCR Master Mix | 1.25 mL | 5×1.25mL | 50×1.25mL | -20℃ |
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Core Components
The master mix contains:
dNTP Mix (including dATP, dTTP, dCTP, dGTP, and dUTP)
Antibody-modified hot-start DNA polymerase (Anstart Taq-D)
UDG (Uracil-DNA Glycosylase)
Users only need to add primers, probes (or fluorescent dyes), and template DNA to perform fluorescence-based qPCR.
UDG Contamination Control Mechanism
During the initial 50°C, 2 min incubation, UDG cleaves the N-glycosidic bond between uracil and the sugar-phosphate backbone in any contaminating PCR products containing dUTP, releasing free uracil.
Subsequent 95°C, 2.5 min heat treatment inactivates UDG while further degrading the phosphodiester backbone, effectively eliminating carryover contamination from uracil-containing PCR products.
UDG acts on both single- and double-stranded DNA but is inactive against RNA.
Compatible Instruments
ABI 7500, Qiagen QiaQuant 5-plex
For other instruments not listed, this kit has not been fully validated. If required, please contact our technical support team for further assistance.
Protocol
1. Reagent Preparation (Reagent Setup Area)
1.1 Thaw the master mix at -20 ± 5°C, equilibrate to room temperature, vortex briefly, and centrifuge at low speed for 15 sec before use.
Recommendation: Aliquot PCR reagents to avoid repeated freeze-thaw cycles.
1.2 Prepare the PCR reaction mix according to the table below:
Component
| Volume/25μL
| Volume/50μL
|
2× Anstart Taq-D qPCR Master Mix
| 12.5 μL
| 25 μL
|
Primer-probe Mix
| 1 μL
| 2 μL
|
Templates
| 5 μL
| 10 μL
|
ddH2O
| Up to 25 μL
| Up to 50 μL
|
Total
| 25 μL
| 50 μL |
Note 1: Primer and template volumes can be adjusted as needed.
Note 2: For fast cycling programs, a 25 μL reaction volume is recommended.
1.3 Mix gently by pipetting or brief vortexing, then centrifuge briefly to collect liquid at the tube bottom.
1.4 Transfer PCR tubes to the thermal cycler and initiate the reaction.
2. Sample Preparation (Sample Prep Area)
Add the appropriate sample volume as required.
3. PCR Amplification (Amplification Area)
3.1 Preheat the instrument and verify performance.
3.2 Load prepared PCR tubes into the instrument and record tube positions. Set fluorescence channels as needed.
Recommended Cycling Programs
Standard Program
Step
| Cycles
| Temp.
| Time
| Data Acquisition
|
| 1 | 1 | 50℃
| 2min
| No
|
| 2 | 1 | 95℃
| 2min 30s
| No
|
| 3 | 45 | 94℃
| 10s
| No
|
| 4 | 45
| 55℃
| 40s
| Yes |
| 5 | 1 | 25℃
| 10s
| No |
Fast Program
Step
| Cycles
| Temp.
| Time
| Data Acquisition
|
| 1 | 1 | 50℃
| 2min
| No
|
| 2 | 1 | 95℃
| 30s
| No
|
| 3 | 45 | 94℃
| 5s
| No
|
| 4 | 45
| 55℃
| 15s
| Yes |
| 5 | 1 | 25℃
| 10s
| No |
Fluorescence acquisition can be set for 2-step or 3-step PCR depending on experimental needs.
危险品化学品经营许可证（带存储）