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ActiBioPure™,EnzymoPure™,生物活性,重组,高性能 级 提供 ≥90%(SDS-PAGE) 纯度,适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。
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在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 3 篇同行评审文献引用。
鞘磷脂酶是一种水解酶,参与鞘磷脂代谢过程。鞘磷脂酶水解鞘磷脂,使其向磷酸胆碱和神经酰胺转化。鞘磷脂酶还在细胞分化、各种免疫和炎症反应以及细胞内胆固醇运输和代谢中发挥重要作用。对磷脂酰胆碱几乎无活性。
测定原理

反应生成的醌亚胺染料的量可用分光光度计在 555 nm 波长下检测。
试剂准备
试剂 I:0.1 M Tris-HCl,pH8.0。
试剂 II:10 mM MgCl₂ 溶液。
试剂 III:6 mM 鞘磷脂溶液:称取 45.8mg 的鞘磷脂,溶于 10mL 的无菌水中 (含 5% 的 Triton X-100)。
试剂 IV:500 U/mL ALP 溶液。
试剂 V:120 U/mL COD 溶液。
试剂 VI:1 kU/mL POD 溶液,取 1000U 的 POD 溶于 1mL 的双蒸水。
试剂 VII:50 mM 4–AA 溶液。
试剂 VIII:50 mM TOOS 溶液。
试剂 IX:1.0 M NaCl 溶液。
试剂 X:1 %(W/V) Triton X-100 溶液。
酶稀释液:10 mM pH8.0 Tris-HCl,含 0.1% Triton X-100 和 10 mM NaCl。
按如下配制反应混合物:
试剂 II 20mL,试剂 III 10mL,试剂 VI 0.5mL,试剂 VII 3mL,试剂 VIII 3 mL,试剂 IX 1mL,试剂 X 10mL,试剂 I 定容至 90mL;
样品:用酶稀释液将酶稀释至 0.01U/mL。
分析程序
1. 向比色皿中加入 900μL 反应混合液。
2. 将反应混合物在 37℃预热 5min。
3. 向反应混合物中加入 20μL 试剂 IV 和 80μL 试剂 V,50μL 酶液,混匀,37℃反应,并用分光光度计在 555 nm 下,记录 1 min 内的吸光度变化 (∆As)。
* 用酶稀释液替代酶液,其它步骤相同,所得溶液吸光度为空白吸光度 (∆Ab)
ΔA=ΔAs−ΔAb
检测结果
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Vt: 反应液总体积 (1.05mL);
Vs: 酶液体积 (0.05mL);
1: 反应时间 (min);
1/2:1 摩尔过氧化氢生成 1/2 摩尔醌亚胺染料;
df: 稀释倍数;
C: 酶浓度 ( mg/mL);
39.2: 标准反应条件下,生色基团在 555nm 处毫摩尔吸光系数 (cm²/μmol)。
Sphingomyelin phosphodiesterase, Streptomyces sp., a hydrolase, is involved in the sphingomyelin metabolism process. Sphingomyelin phosphodiesterase hydrolyzes the conversion of sphingomyelin to phosphocholine and ceramide. Sphingomyelin phosphodiesterase also plays an important role in cellular differentiation, various immune and inflammatory responses, and intracellular cholesterol trafficking and metabolism. Has very little activity on phosphatidylcholine.
Principle

The amount of quinoneimine dye generated by the reaction can be detected with a spectrophotometer at 555 nm.
Reagent Preparation
Reagent Ⅰ: 0.1 M Tris-HCl, pH 8.0
Reagent Ⅱ: 10 mM MgCl₂ solution
Reagent Ⅲ: 6 mM Sphingomyelin solution: Weigh 45.8 mg of sphingomyelin and dissolve it in 10 mL of sterile water (containing 5% Triton X-100)
Reagent Ⅳ: 500 U/mL ALP solution
Reagent Ⅴ: 120 U/mL COD solution
Reagent Ⅵ: 1 kU/mL POD solution: Dissolve 1000 U of POD in 1 mL of double-distilled water
Reagent Ⅶ: 50 mM 4-AA solution
Reagent Ⅷ: 50 mM TOOS solution
Reagent Ⅸ: 1.0 M NaCl solution
Reagent Ⅹ: 1% (W/V) Triton X-100 solution Enzyme dilution buffer: 10 mM Tris-HCl (pH 8.0), containing 0.1% Triton X-100 and 10 mM NaCl
Prepare the reaction mixture as follows:Reagent Ⅱ: 20 mL, Reagent Ⅲ: 10 mL, Reagent Ⅵ: 0.5 mL, Reagent Ⅶ: 3 mL, Reagent Ⅷ: 3 mL, Reagent Ⅸ: 1 mL, Reagent Ⅹ: 10 mL, Make up the volume to 90 mL with Reagent Ⅰ
Sample: Dilute the enzyme to 0.01 U/mL with the enzyme dilution buffer.
Analytical Procedure
1. Add 900 μL of the reaction mixture to a cuvette.
2. Preincubate the reaction mixture at 37 ℃ for 5 min.
3. Add 20 μL of Reagent Ⅳ, 80 μL of Reagent Ⅴ and 50 μL of enzyme solution to the reaction mixture, mix well, incubate at 37 ℃ for the reaction, and record the absorbance change (ΔAₛ) within 1 min at 555 nm with a spectrophotometer.
Detection Results
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Notes:
Vt: Total volume of the reaction solution (1.05 mL)
Vs: Volume of the enzyme solution (0.05 mL)
1: Reaction time (min)
1/2: 1 mole of hydrogen peroxide generates 1/2 mole of quinoneimine dye
df: Dilution factor
C: Enzyme concentration (mg/mL)
39.2: Molar absorptivity of the chromophore at 555 nm under standard reaction conditions (cm²/μmol)
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| 批号(Lot Number) | 证书类型 | 货号 |
|---|---|---|
| 分析证书 | R1505816 | |
| 分析证书 | R1505816 | |
| 分析证书 | R1505816 |
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