鞘磷脂酶

CAS: 9031-54-3 货号: R1505816 EC号: 232-869-9 PubChem CID: 168009913
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级别和纯度: 生物活性 ? 生物活性级(Bioactive)—— 经验证在功能检测中保持生物活性。当分子须具有功能活性而不仅是纯度时使用。 重组 ? 重组(Recombinant)—— 通过重组表达生产,序列确定、批次稳定。适用于来源明确、无动物源的可重现蛋白。 ActiBioPure™ ? ActiBioPure™ —— 阿拉丁面向生物活性和重组产品的优质系列。当同时需要高纯度和保持生物活性时使用。 高性能 ? 高性能级 —— 纯度和性能特性经过优化。适用于普通等级无法满足的灵敏分析。 EnzymoPure™ ? EnzymoPure™ —— 阿拉丁的高质量酶解决方案系列。当酶纯度和明确活性决定检测或工艺性能时使用。 ≥90%(SDS-PAGE) ≥200 U/mg enzyme powder; expressed in Pichia pastoris
Accession #
P80924
表达系统
毕赤酵母
生物活性
≥200 U/mg enzyme powder
★
规格
库存
价格
数量
50U
R1505816-50U
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¥699.90
250U
R1505816-250U
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1KU
R1505816-1KU
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为什么选择此级别

ActiBioPure™,EnzymoPure™,生物活性,重组,高性能 级 提供 ≥90%(SDS-PAGE) 纯度,适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。

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储存与运输

-20°C储存,避免反复冻融。超低温运输 。请查阅批次 COA 获取详细规格。

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质量文档

SDS、COA、产品数据表及规格说明书均可下载。可通过批号查询获取批次 COA。

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文献证明

在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 3 篇同行评审文献引用。

概述

  鞘磷脂酶是一种水解酶,参与鞘磷脂代谢过程。鞘磷脂酶水解鞘磷脂,使其向磷酸胆碱和神经酰胺转化。鞘磷脂酶还在细胞分化、各种免疫和炎症反应以及细胞内胆固醇运输和代谢中发挥重要作用。对磷脂酰胆碱几乎无活性。

测定原理 

反应生成的醌亚胺染料的量可用分光光度计在 555 nm 波长下检测。 

试剂准备 

试剂 I:0.1 M Tris-HCl,pH8.0。

试剂 II:10 mM MgCl₂ 溶液。

试剂 III:6 mM 鞘磷脂溶液:称取 45.8mg 的鞘磷脂,溶于 10mL 的无菌水中 (含 5% 的 Triton X-100)。

试剂 IV:500 U/mL ALP 溶液。

试剂 V:120 U/mL COD 溶液。

试剂 VI:1 kU/mL POD 溶液,取 1000U 的 POD 溶于 1mL 的双蒸水。

试剂 VII:50 mM 4–AA 溶液。

试剂 VIII:50 mM TOOS 溶液。

试剂 IX:1.0 M NaCl 溶液。

试剂 X:1 %(W/V) Triton X-100 溶液。

酶稀释液:10 mM pH8.0 Tris-HCl,含 0.1% Triton X-100 和 10 mM NaCl。 

按如下配制反应混合物:

试剂 II 20mL,试剂 III 10mL,试剂 VI 0.5mL,试剂 VII 3mL,试剂 VIII 3 mL,试剂 IX 1mL,试剂 X 10mL,试剂 I 定容至 90mL;

样品:用酶稀释液将酶稀释至 0.01U/mL。

分析程序

1. 向比色皿中加入 900μL 反应混合液。

2. 将反应混合物在 37℃预热 5min。

3. 向反应混合物中加入 20μL 试剂 IV 和 80μL 试剂 V,50μL 酶液,混匀,37℃反应,并用分光光度计在 555 nm 下,记录 1 min 内的吸光度变化 (∆As)。

* 用酶稀释液替代酶液,其它步骤相同,所得溶液吸光度为空白吸光度 (∆Ab)

ΔA=ΔAs−ΔAb

检测结果 

Vt: 反应液总体积 (1.05mL);

Vs: 酶液体积 (0.05mL);

1: 反应时间 (min);

1/2:1 摩尔过氧化氢生成 1/2 摩尔醌亚胺染料;

df: 稀释倍数;

C: 酶浓度 ( mg/mL);

39.2: 标准反应条件下,生色基团在 555nm 处毫摩尔吸光系数 (cm²/μmol)。 

  Sphingomyelin phosphodiesterase, Streptomyces sp., a hydrolase, is involved in the sphingomyelin metabolism process. Sphingomyelin phosphodiesterase hydrolyzes the conversion of sphingomyelin to phosphocholine and ceramide. Sphingomyelin phosphodiesterase also plays an important role in cellular differentiation, various immune and inflammatory responses, and intracellular cholesterol trafficking and metabolism. Has very little activity on phosphatidylcholine.

Principle

The amount of quinoneimine dye generated by the reaction can be detected with a spectrophotometer at 555 nm.

Reagent Preparation

Reagent Ⅰ: 0.1 M Tris-HCl, pH 8.0

Reagent Ⅱ: 10 mM MgCl₂ solution

Reagent Ⅲ: 6 mM Sphingomyelin solution: Weigh 45.8 mg of sphingomyelin and dissolve it in 10 mL of sterile water (containing 5% Triton X-100)

Reagent Ⅳ: 500 U/mL ALP solution

Reagent Ⅴ: 120 U/mL COD solution

Reagent Ⅵ: 1 kU/mL POD solution: Dissolve 1000 U of POD in 1 mL of double-distilled water

Reagent Ⅶ: 50 mM 4-AA solution

Reagent Ⅷ: 50 mM TOOS solution

Reagent Ⅸ: 1.0 M NaCl solution

Reagent Ⅹ: 1% (W/V) Triton X-100 solution Enzyme dilution buffer: 10 mM Tris-HCl (pH 8.0), containing 0.1% Triton X-100 and 10 mM NaCl 

Prepare the reaction mixture as follows:Reagent Ⅱ: 20 mL, Reagent Ⅲ: 10 mL, Reagent Ⅵ: 0.5 mL, Reagent Ⅶ: 3 mL, Reagent Ⅷ: 3 mL, Reagent Ⅸ: 1 mL, Reagent Ⅹ: 10 mL, Make up the volume to 90 mL with Reagent Ⅰ 

Sample: Dilute the enzyme to 0.01 U/mL with the enzyme dilution buffer.

Analytical Procedure  

1. Add 900 μL of the reaction mixture to a cuvette.

2. Preincubate the reaction mixture at 37 ℃ for 5 min.

3. Add 20 μL of Reagent Ⅳ, 80 μL of Reagent Ⅴ and 50 μL of enzyme solution to the reaction mixture, mix well, incubate at 37 ℃ for the reaction, and record the absorbance change (ΔAₛ) within 1 min at 555 nm with a spectrophotometer.

Replace the enzyme solution with the enzyme dilution buffer and perform the same procedures; the absorbance of the resulting solution is the blank absorbance (ΔAᵦ).
ΔA=ΔAs​−ΔAb

Detection Results

Notes:

Vt: Total volume of the reaction solution (1.05 mL)

Vs: Volume of the enzyme solution (0.05 mL)

1: Reaction time (min)

1/2: 1 mole of hydrogen peroxide generates 1/2 mole of quinoneimine dye

df: Dilution factor

C: Enzyme concentration (mg/mL)

39.2: Molar absorptivity of the chromophore at 555 nm under standard reaction conditions (cm²/μmol)

规格

产品名称
鞘磷脂酶
英文别名
Sphingomyelin phosphodiesterase | Sphingomyelin choline phosphohydrolase | sphingomyelin cholinephosphohydrolase | acid sphingomyelinase | eutral sphingomyelinase
规格或纯度
生物活性,重组,ActiBioPure™,高性能,EnzymoPure™,≥90%(SDS-PAGE),≥200 U/mg enzyme powder; expressed in Pichia pastoris
生物活性
≥200 U/mg enzyme powder
表达系统
毕赤酵母
来源
重组表达
CAS编号和信息
9031-54-3
酶学委员会编号
EC 3.1.4.12
分子类型
酶
产品线
生物产品
储存与运输
物理形态
冻干(Lyophilized)
浓度
≥200 U/mg enzyme powder; expressed in Pichia pastoris
复溶
Reconstitute in pure water.
储存条件
-20°C储存,避免反复冻融
运输条件
超低温运输
稳定性与储存
长期储存-20℃(24个月);复溶后建议分装,避免反复冻融。
单位定义
在下述条件下,每分钟催化生成 1 μmol 过氧化氢(H₂O₂)所需的酶量。

技术文档

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高级数据

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C of A & Other Certificates(BSE/TSE, COO):
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找到3个结果

批号(Lot Number) 证书类型 货号
ZJ26F0435005 分析证书 R1505816
ZJ26F0435004 分析证书 R1505816
ZJ26F0435003 分析证书 R1505816
技术文档和文章
此产品的引用文献
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