计算溶液所需的质量、体积或浓度。
ActiBioPure™,EnzymoPure™,生物活性,重组,高性能 级 ,适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。
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在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。
甘油脱氢酶(Glycerol dehydrogenase)是一种 NAD 依赖性酶,主要催化甘油氧化为二 羟基丙酮(DHA),属于多元醇脱氢酶家族。
应用: 该酶与脂蛋白脂肪酶联用,可用于甘油和甘油三酯的酶法测定。
原理:

试剂:
A. 碳酸盐 - 碳酸氢盐缓冲液,200mM(将 0.2M K₂CO₃ 和 0.2M NaHCO₃ 混合,pH 值为 11.0)
B. 甘油溶液:0.3M
C. 硫酸铵溶液:1.0M
D. NAD⁺ 溶液:10mM [称取 143.5mg NAD⁺ (MW=717.45) 并溶解于 18.0ml 的 H₂O 中,并用 0.5N 氢氧化钾将 pH 调节至 7.0 后,用 H₂O 定容至 20.0ml(应新鲜配制)]
E. 酶稀释剂:20mM K - 磷酸盐缓冲液,pH7.5
操作步骤:
1. 使用前立即配制以下工作溶液。
30.0 ml 碳酸盐 - 碳酸氢盐缓冲液,pH11.0 (A)
22.0 ml 基质溶液 (B)
2.0 ml 硫酸铵溶液 (C)
6.0 ml NAD⁺溶液 (D)
测定混合液中的浓度
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确保 pH 值在 10.0~10.5 范围内。若超出此范围,请用 1.0N 氢氧化钾或 1.0N 盐酸将 pH 值调节至 10.5,并置于冰上棕色瓶中保存。
2. 取 2.9 毫升工作液移入比色皿(光径 1 厘米),置于 25℃恒温条件下平衡约 5 分钟。
3. 加入 0.1 毫升酶溶液 *,轻轻倒置混合。
4 在 25℃恒温的分光光度计中,以水为参比记录 340nm 波长下 3-4 分钟的光密度变化,然后根据曲线初始线性部分计算每分钟的△OD 值(△OD test)。
同时,采用与测试相同的方法测定空白率(△OD Blank),但需将酶溶液替换为酶稀释液。
计算方法:
可使用以下公式计算酶活性:
Volume activity (U / ml)=[(△OD / min (△OD test - △OD blank ) × Vt × df)] / (6.22 × 1.0 × Vs)=△OD / min × 4.82 × df
Weight activity (U / mg)=(U / ml) × 1 / C
Vt:总体积 (3.0ml)
Vs:样品体积 (0.1ml)
6.22:NADH 的毫摩尔消光系数 (cm²/μmol)
1.0:光路长度 (cm)
df:稀释因子
C:溶解液中的酶浓度 (c mg/ml)
Glycerol dehydrogenase is a nad dependent enzyme, which mainly catalyzes the oxidation of glycerol to dihydroxyacetone (DHA), belonging to the polyol dehydrogenase family.
Application: This enzyme is useful for enzymatic determination of glycerol and of triglyceride when coupled with lipoprotein lipase in clinical analysis.
Principle:

Reagents:
A. Carbonate-bicarbonate buffer, pH11.0: 200mM (Prepare by mixing 0.2M K₂CO₃ and 0.2M NaHCO₃ to reach pH11.0)
B. Glycerol solution: 0.3M
C. Ammonium sulfate solution: 1.0M
D. NAD⁺ solution: 10mM [Weigh 143.5mg of NAD⁺ (MW=717.45) and dissolve in 18.0ml of H₂O and, after adjusting the pH to 7.0 with 0.5N KOH fill up to 20.0ml with H₂O (Should be prepared fresh)]
E. Enzyme diluent: 20mM K-phosphate buffer,pH7.5.
Procedure:
1. Prepare the following working solution, immediately before use.
30.0ml Carbonate-bicarbonate buffer,pH11.0 (A)
22.0ml Substrate solution (B)
2.0ml Ammonium sulfate solution (C)
6.0ml NAD⁺ solution (D)
Concentration in assay mixture
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Be sure the pH in the range(pH10.0~10.5).If not, adjust the pH to 10.5 with 1.0N KOH or 1.0N HCl, and store on ice in a brownish bottle.
2. Pipette 2.9ml of the working solution into a cuvette (d=1 cm) and equilibrate at 25°C for about 5 min.
3. Add 0.1ml of the enzyme solution* and mix by gentle inversion.
4. Record the increase of optical density at 340nm against water for 3~4minutes in a spectrophotometer thermostated at 25°C ,and calculate the △OD per minute from the initial linear portion of the curve (△OD test).
At the same time,measure the blank rate(△OD Blank)by using the same method as the test expect that the enzyme diluent is added instead of the enzyme solution.
Calcuation:
Activity can be calculated by using the following formula:
Volume activity (U / ml)=[(△OD / min (△OD test - △OD blank ) × Vt × df)] / (6.22 × 1.0 × Vs)=△OD / min × 4.82 × df
Weight activity (U / mg)=(U / ml) × 1 / C
Vt: Total volume (3.0ml)
Vs: Sample volume (0.1ml)
6.22: Millimolar extinction coefficient of NADH (cm²/μmol)
1.0: Light path length (cm)
df: Dilution factor
C: Enzyme concentration in dissolution (c mg/ml)
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| 批号(Lot Number) | 证书类型 | 货号 |
|---|---|---|
| 分析证书 | R1506883 | |
| 分析证书 | R1506883 | |
| 分析证书 | R1506883 |
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