甘油脱氢酶 (GYD)

CAS: 9028-14-2 货号: R1506883 EC号: 232-824-3
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级别和纯度: 生物活性 ? 生物活性级(Bioactive)—— 经验证在功能检测中保持生物活性。当分子须具有功能活性而不仅是纯度时使用。 重组 ? 重组(Recombinant)—— 通过重组表达生产,序列确定、批次稳定。适用于来源明确、无动物源的可重现蛋白。 ActiBioPure™ ? ActiBioPure™ —— 阿拉丁面向生物活性和重组产品的优质系列。当同时需要高纯度和保持生物活性时使用。 高性能 ? 高性能级 —— 纯度和性能特性经过优化。适用于普通等级无法满足的灵敏分析。 EnzymoPure™ ? EnzymoPure™ —— 阿拉丁的高质量酶解决方案系列。当酶纯度和明确活性决定检测或工艺性能时使用。 expressed in E.coli;≥30 U/mg enzyme powder
Accession #
P50173
表达系统
E. coli
生物活性
≥30 U/mg enzyme powder
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50U
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ActiBioPure™,EnzymoPure™,生物活性,重组,高性能 级 ,适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。

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-20°C储存,避免反复冻融。超低温运输 。请查阅批次 COA 获取详细规格。

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文献证明

在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。

概述

甘油脱氢酶(Glycerol dehydrogenase)是一种 NAD 依赖性酶,主要催化甘油氧化为二 羟基丙酮(DHA),属于多元醇脱氢酶家族。

应用: 该酶与脂蛋白脂肪酶联用,可用于甘油和甘油三酯的酶法测定。

原理:

试剂:

A. 碳酸盐 - 碳酸氢盐缓冲液,200mM(将 0.2M K₂CO₃ 和 0.2M NaHCO₃ 混合,pH 值为 11.0)

B. 甘油溶液:0.3M

C. 硫酸铵溶液:1.0M

D. NAD⁺ 溶液:10mM [称取 143.5mg NAD⁺ (MW=717.45) 并溶解于 18.0ml 的 H₂O 中,并用 0.5N 氢氧化钾将 pH 调节至 7.0 后,用 H₂O 定容至 20.0ml(应新鲜配制)]

E. 酶稀释剂:20mM K - 磷酸盐缓冲液,pH7.5

操作步骤:

1. 使用前立即配制以下工作溶液。

30.0 ml  碳酸盐 - 碳酸氢盐缓冲液,pH11.0 (A)

22.0 ml  基质溶液 (B)

2.0 ml    硫酸铵溶液 (C)

6.0 ml    NAD⁺溶液 (D)

测定混合液中的浓度
碳酸盐缓冲液100mM
甘油100mM
NAD⁺1.0mM
硫酸铵33mM

确保 pH 值在 10.0~10.5 范围内。若超出此范围,请用 1.0N 氢氧化钾或 1.0N 盐酸将 pH 值调节至 10.5,并置于冰上棕色瓶中保存。 

2. 取 2.9 毫升工作液移入比色皿(光径 1 厘米),置于 25℃恒温条件下平衡约 5 分钟。

3. 加入 0.1 毫升酶溶液 *,轻轻倒置混合。

4 在 25℃恒温的分光光度计中,以水为参比记录 340nm 波长下 3-4 分钟的光密度变化,然后根据曲线初始线性部分计算每分钟的△OD 值(△OD test)。

同时,采用与测试相同的方法测定空白率(△OD Blank),但需将酶溶液替换为酶稀释液。

* 将酶制剂溶解于冰浴冷却的酶稀释液 (E) 中,用相同缓冲液稀释至 0.10~0.25U/ml,冰浴保存。

计算方法:

可使用以下公式计算酶活性:

Volume activity (U / ml)=[(△OD / min (△OD test - △OD blank ) × Vt × df)] / (6.22 × 1.0 × Vs)=△OD / min × 4.82 × df

Weight activity (U / mg)=(U / ml) × 1 / C

Vt:总体积 (3.0ml)

Vs:样品体积 (0.1ml)

6.22:NADH 的毫摩尔消光系数 (cm²/μmol)

1.0:光路长度 (cm)

df:稀释因子

C:溶解液中的酶浓度 (c mg/ml)


Glycerol dehydrogenase is a nad dependent enzyme, which mainly catalyzes the oxidation of glycerol to dihydroxyacetone (DHA), belonging to the polyol dehydrogenase family.

Application: This enzyme is useful for enzymatic determination of glycerol and of triglyceride when coupled with lipoprotein lipase in clinical analysis.

Principle:

Reagents:

A. Carbonate-bicarbonate buffer, pH11.0: 200mM (Prepare by mixing 0.2M K₂CO₃ and 0.2M NaHCO₃ to reach pH11.0)

B. Glycerol solution: 0.3M

C. Ammonium sulfate solution: 1.0M

D. NAD⁺ solution: 10mM [Weigh 143.5mg of NAD⁺ (MW=717.45) and dissolve in 18.0ml of H₂O and, after adjusting the pH to 7.0 with 0.5N KOH fill up to 20.0ml with H₂O (Should be prepared fresh)]

E. Enzyme diluent: 20mM K-phosphate buffer,pH7.5.

Procedure:

1. Prepare the following working solution, immediately before use.

30.0ml Carbonate-bicarbonate buffer,pH11.0 (A)

22.0ml Substrate solution (B)

2.0ml Ammonium sulfate solution (C)

6.0ml NAD⁺ solution (D)

Concentration in assay mixture
Carbonate buffer100mM
Glycerol100mM
NAD⁺1.0mM
Ammonium sulfate33mM

Be sure the pH in the range(pH10.0~10.5).If not, adjust the pH to 10.5 with 1.0N KOH or 1.0N HCl, and store on ice in a brownish bottle. 

2. Pipette 2.9ml of the working solution into a cuvette (d=1 cm) and equilibrate at 25°C for about 5 min.

3. Add 0.1ml of the enzyme solution* and mix by gentle inversion.

4. Record the increase of optical density at 340nm against water for 3~4minutes in a spectrophotometer thermostated at 25°C ,and calculate the △OD per minute from the initial linear portion of the curve (△OD test).

At the same time,measure the blank rate(△OD Blank)by using the same method as the test expect that the enzyme diluent is added instead of the enzyme solution.

*:Dissolve the enzyme preparation in ice-cold enzyme diluent(E)and dilute to 0.10~0.25U/ml with the same buffer and store on ice.

Calcuation:

Activity can be calculated by using the following formula:

Volume activity (U / ml)=[(△OD / min (△OD test - △OD blank ) × Vt × df)] / (6.22 × 1.0 × Vs)=△OD / min × 4.82 × df

Weight activity (U / mg)=(U / ml) × 1 / C

Vt: Total volume (3.0ml)

Vs: Sample volume (0.1ml)

6.22: Millimolar extinction coefficient of NADH (cm²/μmol)

1.0: Light path length (cm)

df: Dilution factor

C: Enzyme concentration in dissolution (c mg/ml)

规格

产品名称
甘油脱氢酶 (GYD)
英文别名
glycerol dehydrogenase | glycerin dehydrogenase | NAD+-linked glycerol dehydrogenase | NAD-linked glycerol dehydrogenase | glycerol:NAD+ 2-oxidoreductase | gldA
规格或纯度
ActiBioPure™,生物活性,重组,高性能,EnzymoPure™,expressed in E.coli;≥30 U/mg enzyme powder
生物活性
≥30 U/mg enzyme powder
表达系统
E. coli
CAS编号和信息
9028-14-2
酶学委员会编号
EC 1.1.1.6
分子类型
酶
产品线
生物产品
储存与运输
物理形态
冻干(Lyophilized)
浓度
expressed in E.coli;≥30 U/mg enzyme powder
复溶
Reconstitute in pure water.
储存条件
-20°C储存,避免反复冻融
运输条件
超低温运输
稳定性与储存
长期储存-20℃(24个月);复溶后建议分装,避免反复冻融。
单位定义
在 pH11 和 25℃条件下,每单位可使每分钟生成 1 微摩尔 NADH。

技术文档

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批号(Lot Number) 证书类型 货号
ZJ26F0435010 分析证书 R1506883
ZJ26F0435009 分析证书 R1506883
ZJ26F0435008 分析证书 R1506883
技术文档和文章
溶液计算器

常见问题

什么是「生物活性」?
「生物活性」表示该产品经过加工和检测,适用于生物和生化应用。规格可能包括内毒素限值、微生物控制、无菌性、低 DNase/RNase/蛋白酶活性,以及在相关情况下的生物活性验证。
什么是「重组」?
「重组」是一个明确定义的分析纯度级别,适用于需要特定验证属性的工作流程。它规定了最低含量百分比、对常见杂质(水分、重金属、灼烧残渣)的受控限值,以及批间一致性。「重组」是几个纯度级别之一——请根据方法的灵敏度和监管要求进行选择。
本产品应如何储存?
请于?20 °C条件下保存。避免反复冻融。建议按单次用量分装保存。
本产品如何运输?
本产品采用保温箱配冰袋运输。收货后请立即拆包,并按上述储存条件保存。
本产品的 CAS 号、分子式和分子量是多少?
本产品的 CAS 号为 9028-14-2。
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