UltraBio™红色/绿色荧光DNA Marker染料特点
1. 条带美观：UltraBio™红色/绿色荧光DNA Marker染料完全克服了原装国内外类似染料分不开大片段DNA的缺点，条带清晰整齐美观。
2. 相对安全：独特油性大分子使其不能穿透细胞膜进入细胞，在凝胶染色浓度下无致突变性，可以代替致癌物溴化乙锭EB作为各种核酸电泳的染色剂。
3. 迁移率好：EB小分子很快跑出胶外，所以EB容易导致小DNA片段看不清，UltraBio™红色荧光DNA Marker染料完全克服这一点。
4. 定量准确：适用于核酸分子大小的确定和定量，EB对小DNA片段定量不准确。
5. 染色均匀：整个凝胶负极端和正极端的亮度一样。EB会导致胶的整体背景稍微高些，经常出现阴阳背景（胶的背景一部分亮一部分暗）；EB长时间、长距离的电泳，EB信号强度会相应下降。UltraBio™红色荧光DNA Marker染料完全克服这一点。
6. 灵敏度高：适用于各种大小片段的电泳染色，对核酸迁移的影响小于SYBR Green I。
7. 稳定性高：耐热，可加在缓冲液里，100℃溶解凝胶，防止染色剂没充分混匀。适用于微波或其它加热方法制备琼脂糖凝胶。
8. 耐光性强：实验室的日常光线照射环境下可以常温放置24个月。
9. 信噪比好：样品荧光信号强，背景信号低，荧光亮度是EB的十倍以上，肉眼可观测到亮度明显比EB强。
10. 操作简单：与EB用法完全一样，在预制胶和电泳过程中染料不降解；而电泳后染色过程也只需30 分钟且无需脱色或冲洗。
11. 适用范围广：适用于琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶电泳；可用于 dsDNA、ssDNA 或 RNA 染色。
12. 完美兼容：UltraBio™红色荧光DNA Marker染料兼容所有的紫外凝胶透射仪；UltraBio™绿色荧光DNA Marker染料兼容所有的蓝光仪和可见光仪器。UltraBio™红色荧光DNA Marker染料与EB有相近的光谱特性，无需改变滤光片及观察装置：标准的EB滤光片或SYBR滤光片都适用，使用和EB相同紫外凝胶透射仪，在300nm紫外光附近可得到最佳激发。
储存条件：4℃避光可保存24个月。
操作步骤：
一．胶染法（预染法，UltraBio™红色/绿色荧光DNA Marker染料用法与EB操作步骤完全相同）
制胶时加入UltraBio™红色荧光DNA Marker染料(染料灵敏，每10mL 琼脂糖溶液中加入200μL UltraBio™红色荧光DNA Marker染料原装液即可)。 按常规方法电泳。
1. 实验室材料和试剂：
（1） 实验样品：质粒DNA，DNA marker（国产的DNA marker浓度太高，至少稀释2～3倍后使用）
（2） TBE缓冲液配置：10X TBE电泳缓冲液[Tris 107.8146g (890mM),硼酸55.0287g(890mM)，EDTA 5.845g(20mM),加NaOH约4g调节pH=8.3；定容1000mL]；用ddH2O稀释10倍配制1X TBE电泳缓冲液。
（3） TAE缓冲液配置：50X TAE电泳缓冲液[Tris 242g (2M),EDTA 37.2g(100mM),加醋酸约57ml调节pH=8.5；定容1000mL]；用ddH2O稀释50倍配制1X TAE电泳缓冲液。
（4） 溴酚蓝指示剂，1%的西班牙琼脂糖凝胶，电泳仪（130v），移液器(0.5~10ul)，凝胶成像仪
2. 实验步骤：
（1） 制胶：将0.1g琼脂糖溶于10mL 1X TBE电泳缓冲液中，加热至琼脂糖完全融化。将融好的琼脂糖溶液室温放置50℃左右加入200uL的UltraBio™红色荧光DNA Marker染料凝胶电泳染料，摇匀。
（2） 倒胶：将制好的琼脂糖凝胶缓慢倒于制胶托盘内，避免产生气泡。将点样梳子垂直置于电泳胶膜的一端，距离托盘底部约1mm。放置时尽量保持平稳，切勿晃动。
（3） 置胶：待约30分钟左右胶体充分凝固后，缓慢垂直向上拔起点样梳子，切勿用力过猛。（夏季适当延长凝胶时间）
（4） 将琼脂糖凝胶放入电泳槽内，加入电泳缓冲液，使电泳缓冲液液面高于凝胶面约1~2mm。
（5） 将混合溴酚蓝指示剂的DNA样本（1ul溴酚蓝与2ul DNA标本混合）加入到点样孔内。
（6） 盖上电泳槽盖，开启电源，使DNA从负极移向正极恒压电泳(电压恒定在120~130v之间，一般可选择130V)。
（7） 当DNA条带距离点样孔约1~2cm后关闭电源，(约30～40分钟)取出凝胶。
（8） 用 302nm 激发的 UV 凝胶成像系统观察结果。
*注：跑完电泳后尽快（1小时内）在凝胶成像系统观察结果，时间长了条带会弥散，DNA条带越小越弥散越快。
*注：染料制胶/配好胶后，可以用保鲜膜包起来，放4度第二天再跑电泳，没有任何问题。
*注：此方法染色染料用量相对较少。染料加入胶中可直接使用微波炉加热，制好的胶溶液可以在室温下保存直至用完。
优化电泳条件参考事项：
因为EB是插入DNA内部变成一个整体分子，所以不容易出现迁移/弥散的问题，而大分子的UltraBio™红色荧光DNA Marker染料与DNA是通过静电吸引非共价结合的，在DNA外面就容易出现条带迁移，特别是大片段DNA！
1) 鉴于UltraBio™红色荧光DNA Marker染料的高灵敏性，建议减少DNA的上样量。DNA样品最佳上样量为～100ng/泳道(常规8泳道小胶孔)。
2) 部分国产的DNA marker浓度太高，稀释一倍后使用！目前国产的部分marker是基于EB染料开发的酶切的混合片段，请使用后染法。
3) 更换电泳缓冲液，新配置的电泳液效果好！用TBE缓冲液代替TAE效果更好！
4) 电泳时电压不宜过高，一般不要超过130V。与EB相比，SafeRed电泳电压要低一些，跑胶的时间长一些。
5) 染料在室温或4℃下避光储存即可；若有沉淀，将染料加热至40~50℃并充分振荡溶解，不影响使用。
6) 由于UltraBio™红色荧光DNA Marker染料具有良好的热稳定性，可以在热的琼脂糖溶液中直接添加后充分振荡混匀。UltraBio™红色荧光DNA Marker染料也可以加到琼脂糖粉末和电泳缓冲液中，然后用微波炉加热以制备琼脂糖凝胶。
7) 个别客户用3X或者6X染料和样品混合后，点样到琼脂糖凝胶中，这个方法得到的结果不稳定，不推荐这种点样方式！
8) 如果总是看到条带弥散或分离不理想，建议使用电泳后泡染法染胶。
*此胶染法(预染法)不适合预制聚丙烯酰胺凝胶，对于聚丙烯酰胺凝胶请使用泡染法(后染法)。
二．泡染法(后染法)
注意：泡染出现的条带弯曲和拖带的现象与样品的质量和凝胶的浓度有关，并不是染料的问题！ 泡染比预染适当提高琼脂糖凝胶浓度约0.2%-0.3%。
（1）按照以上常规方法进行电泳。 用于胶回收等高浓度DNA样品强烈推荐泡染法！
（2）将UltraBio™红色荧光DNA Marker染料稀释约50倍到纯水溶液中制成1×染色液。（例如将200μL UltraBio™红色荧光DNA Marker染料原装液加入到10mL水溶液中）。
（3）将凝胶小心地放入合适的容器中（如聚丙烯容器中）缓慢加入足量的1× 染色液浸没凝胶。室温振荡染色30min左右，最佳染色时间根据凝胶厚度以及琼脂糖浓度不同而略有不同。对于含1％的琼脂糖凝胶，染色时间约30min。 对于含3.5～10％丙烯酰胺的凝胶，染色时间通常介于30 min到1 h。
（4）用 302nm 激发的紫外凝胶成像系统观察结果。
*注意事项：用泡染法染色时，染料用量较多。UltraBio™红色荧光DNA Marker染料室温避光保存，可重复使用3次左右。
三．核酸电泳的PAGE步骤：
1）将TBE制备的凝胶放入电泳槽中，用夹子夹住边缘。
2）用配置凝胶溶液同一批次的5×TBE灌满缓冲液槽。用注射器排除凝胶底部的气泡。
3）用注射器吸取1×TBE冲洗加样孔。将DNA样品和适量的6×凝胶上样缓冲液混合，用微量移液管加入加样孔。
4）将电极与电源相连（正极接下槽），打开电源一般90V；1～8V/cm。进行电泳9h。
5）电泳至标准参照染料迁移至所需位置（一般是电泳到二甲苯完全迁出，溴酚蓝距底边2～3cm停止）。关闭电源，拔掉插头，弃去电泳槽中的电泳液。
6）将凝胶取下来放入，染色皿中，加3X UltraBio™红色荧光DNA Marker染料的1X缓冲液中的振荡染色30-60分，放置在紫外检测即可。
*注意事项：PAGE不能用预染或点染的方法；只能用泡染的方法显色，由于聚丙烯酰胺比较致密，染料不容易深入，显色效果没有琼酯糖凝胶好。
特别提醒：如果用的是紫外成像仪，请选择UltraBio™红色荧光DNA Marker染料；如果使用激光成像仪或在可见光下观测，请选择UltraBio™绿色荧光DNA Marker染料。
ZJ25F0724708
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