超快速T4 DNA连接酶

Name: 超快速T4 DNA连接酶
SKU: rp224201
Availability: InStock

货号: rp224201

COA

有货

级别和纯度: 无动物源 ? 无载体 ? EnzymoPure™ ? 无RNA酶 ? 无菌 ? 1000 U/μL

Accession #

P00970

表达系统

E. coli

生物活性

One unit is defined as the amount of enzyme required to give 50% ligation of HindIII fragments of λ DNA in 30min at 16℃ in 20µl of the assay mixture containing 50mM Tris, pH7.5, 10mM MgCl2, 10mM DTT, 1mM ATP, 25µg/ml BSA and a 5'-DNA termini concentration of 0.12µM (300µg/ml).200U equals 1 Weiss unit， Based on Weiss unit, the packaging of this product is 200U and 1000U respectively.

规格

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40KU

rp224201-40KU

现货

¥109.90

5×40KU

rp224201-5×40KU

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概述规格储存与运输技术文档高级数据质检证书（CoA,COO,BSE/TSE 和分析图谱) 技术文档和文章溶液计算器

🧪

为什么选择此级别

EnzymoPure™,无RNA酶,无动物源,无菌,无载体级，适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。

🌡

储存与运输

-20°C储存,避免反复冻融。超低温运输。请查阅批次 COA 获取详细规格。

📋

质量文档

SDS、COA、产品数据表及规格说明书均可下载。可通过批号查询获取批次 COA。

📚

文献证明

在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。

概述

公司生产的超快速 T4 DNA 连接酶，即 Instant T4 DNA Ligase，是 T4 DNA 连接酶的升级版本，可以快速高效催化粘端或平端双链 DNA 或 RNA 的 5'-P 末端和 3'-OH 末端之间以磷酸二酯键结合，该催化反应需 ATP 作为辅助因子。同时 Instant T4 DNA Ligase 可以修补双链 DNA、双链 RNA 或 DNA/RNA 杂合双链中的单链缺刻(single-strand nicks)。

纯度（Purity）: 不含 DNA 内切酶、外切酶和磷酸酯酶，不含 RNA 酶，满足常规连接反应要求。

组分和说明

rp224201	Component	40KU	5*40KU	Storage
rp224201A	Instant T4 DNA Ligase (1000U/μl)	40μl	5*40μl	-20℃. Avoid freeze/thaw cycle.
rp224201B	10× Ligation Buffer	200μl	5*200μl	-20℃. Avoid freeze/thaw cycle.

产品应用

Instant T4 DNA Ligase 常用于 DNA 片段和载体、linker 或 adaptor 等的连接。也可用于缺刻修复及 Ligase 介导的 RNA 检测。

产品优势

修复及 Ligase 介导的 RNA 检测

使用说明

1. PCR 产物或酶切片段和普通载体的连接。

a. 取 1-2µg 载体酶切过夜，或至少酶切 3-5h 以上。尽量确保酶切充分，否则后续会导致产生很多自连的克隆。

注：如果载体进行的是单酶切，请务必进行去磷酸化处理，推荐使用 Antarctic Phosphatase (Thermosensitive) 避免后续产生很多自连的克隆。

b. 载体酶切或去磷酸化处理完毕后，可以使用试剂盒进行纯化，例如磁珠法 PCR/DNA 纯化试剂盒或 PCR 纯化试剂盒/DNA纯化试剂盒。也可以采用常规的酚氯仿抽提乙醇沉淀方法纯化载体。对于酶切产生较大片段(大于 50-60bp)的情况推荐采用切胶回收的方式。

c. 对于 PCR 产物：PCR产物凝胶电泳后，切胶回收预期大小的 DNA 片段。凝胶中 DNA 片段的回收可以使用试剂盒进行操作，例如的磁珠法DNA 凝胶回收试剂盒或 DNA 凝胶回收试剂盒。也可以采用反复冻融等方法回收 DNA 片段。

d. 对于回收的 PCR 产物或其它需酶切的 DNA 片段，用适当内切酶酶切，随后纯化酶切产物。

注：这一步的酶切不必酶切特别充分，通常酶切效率能达到 80-90%以上即可。即本步骤的酶切通常酶切 1-2 小时即可。酶切产物可使用试剂盒进行纯化，例如阿拉丁的磁珠法 PCR/DNA 纯化试剂盒或PCR纯化试剂盒/DNA 纯化试剂盒。也可以采用常规的酚氯仿抽提乙醇沉淀方法纯化。

e. 取约 25-100ng 经过酶切和纯化的载体，加入 3 倍摩尔数的待插入片段。参考下表设置连接反应体系。

注 1：很多时候由于载体量和待插入片段的量都比较少，在回收后很难定量。此时可以根据回收前电泳条带的亮度进行大致的估计。通常以DNA 分子量标准的某一条带为参考，估计或通过灰度半定量目的条带和该参考条带的亮度的比例关系。然后再按照预计的纯化或凝胶回收时的得率计算出最终得到的载体量和待插入片段量的比例关系。超纯水推荐使用 Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile)。

注 2：通常每个反应使用 0.2-0.5µl 连接酶已经足够，如果希望进一步提高连接效率，可以把连接酶的用量提高至 1µl。

Reagent	Amount
Vector	50-100ng
Insert	3:1 (mole ratio) VS Vector
10× Ligation Buffer	2µl
Ultrapure Water	To 20µl
Instant T4 DNA Ligase	0.2-0.5µl
Total volume	~20µl

f. 用移液器轻轻吹打混匀或轻微 Vortex 混匀，室温离心数秒，使液体积聚于管底。

g. 16ºC 孵育 1-18h，或 20-25ºC 孵育连接 1-2h。

注 1：同时兼容双平端和双粘端 DNA 片段连接。

注 2：通常 16ºC 孵育 1-4h 即可以获得较好的连接效果。 h. 随后即可直接取连接产物用于转化感受态细菌。

2. PCR 产物和 T 载体的连接。

a. PCR 产物凝胶电泳后，切胶回收预期大小的 DNA 片段。凝胶中 DNA 片段的回收可以使用例如磁珠法 DNA 凝胶回收试剂盒或 DNA 凝胶回收试剂盒等试剂盒，也可以采用反复冻融等方法回收 DNA 片段。

b. 按照 T 载体的说明书取适量 T 载体，加入 3 倍摩尔数的待插入片段。参考下表设置连接反应体系。

注 1：很多时候由于载体量和 PCR 产物的量都比较少，在回收后很难定量。此时可以根据回收前电泳条带的亮度进行大致的估计。通常以 DNA 分子量标准的某一条带为参考，估计或通过灰度半定量目的条带和该参考条带的亮度的比例关系。然后再按照预计的纯化或凝胶回收时的得率计算出最终得到的载体量和 PCR 产物的量的比例关系。

注 2：通常每个反应使用 0.2-0.5µl 连接酶已经足够，如果希望进一步提高连接效率，可以把连接酶的用量提高至 1µl。

Reagent	Amount
T vector	As recommended
Insert	3:1 (mole ratio) VS Vector
10× Ligation Buffer	2µl
Ultrapure Water	To 20µl
Instant T4 DNA Ligase	0.2-0.5µl
Total volume	~20µl

c. 用移液器轻轻吹打混匀或轻微 Vortex 混匀，室温离心数秒，使液体积聚于管底。

d. 16ºC 孵育 1-18h，或 20-25ºC 孵育连接 1-2h。

注：通常 16ºC 孵育 1-4h 即可以获得较好的连接效果。

e. 随后即可直接取连接产物用于转化感受态细菌。

3. Linker 或 miRNA/RNAi/ sgRNA 等小 RNA 表达用 DNA 片段和载体的连接：

a. 载体的酶切和纯化同步骤 1a 和 1b。

b. Linker 或 miRNA、RNAi、sgRNA 等小 RNA 表达用 DNA 片段的退火可以选择适当的 DNA 退火缓冲液，进行退火反应。

c. 长度大于 8bp 的 Linker 或退火的小 RNA 表达用 DNA 片段，可以按照 5:1 至 10:1 的比例和载体进行连接反应。例如载体为 0.03pmol，则插入片段可以为 0.15 至 0.3pmol。长度小于 8bp 的 linker，比例需调整为 10:1 以上。

d. 除插入片段的用量外，随后按照步骤 1e-1h 进行。

4. DNA 自身环化的连接：

参考步骤 1e，待插入片段换成适量的水即可。其余步骤按照步骤 1f-1h 进行。

5. 其它类型的 DNA 片段连接参考上述方法进行。

常见问题：

1. 连接反应后转化效率很低或阳性克隆非常少。

a. 可能感受态细菌转化效率太低，用质粒作为阳性对照同时检测感受态的转化效率。

b. 可以尝试提高载体或插入片段的纯度，也可以考虑适当提高载体或插入片段的用量。对于平端连接需注意适当延长连接时间。

c. 可能载体酶切不够充分，用未经连接的载体转化作为阴性对照。

d. 用存放 DNA 的溶液进行转化，作为阴性对照，检测感受态细菌是否存在问题。

保存条件： -20℃保存，≤0℃运输

注意事项：

（1）对于普通的转化大肠杆菌的操作，不必对连接产物进行纯化，连接产物可以直接用于转化。但用电转方法转化大肠杆菌时，通常宜先用 DNA 纯化试剂盒或酚氯仿抽提方法等纯化 DNA，然后再进行电转。

（2）需进行平端连接或快速连接时，推荐使用快速 DNA 连接试剂盒。Instant T4 DNA Ligase 可以进行平端连接，但效率较低。

（3）普通连接反应不必进行凝胶电泳观察。如果需要对于连接产物进行凝胶电泳观察，推荐先在 65℃孵育 10 分钟使Instant T4 DNA Ligase 失活，以避免 Instant T4 DNA Ligase 和 DNA 结合导致的条带位置迁移(band shift)。

（4）本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

（5）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

规格

产品名称

超快速T4 DNA连接酶

别名

T4 DNA 连接酶

英文别名

T4 DNA Ligase

规格或纯度

无动物源, 无载体, EnzymoPure™, 无RNA酶, 无菌, 1000 U/μL

生化机理

DNA ligase, which is expressed in the early stage of lytic development, has been implicated in T4 DNA synthesis and genetic recombination. It may also play a role in T4 DNA repair.

生物活性

表达系统

E. coli

种属

肠杆菌噬菌体T4(Enterobacteria phage T4)

无载体

Yes

无动物源

Yes

来源

重组表达

分子类型

酶

产品线

biological_products

储存与运输

物理形态

液体

储存缓冲液

20mM Tris, 50mM KCl, 1mM DTT, 0.1mM EDTA, 50% (v/v) Glycerol, pH 7.5

浓度

1000 U/μL

储存条件

-20°C储存,避免反复冻融

运输条件

超低温运输

稳定性与储存

-20℃ 储存 24个月；避免反复冻融。

技术文档

📋 安全数据表 (SDS)

全面的危险、操作、储存及法规合规文件。

下载 SDS →

✅ 分析证书 (COA)

批次质量数据。输入批号以获取对应 COA。

查询 COA →

📊 产品数据表

产品规格和应用的快速参考摘要。

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🔬 规格说明书

该级别的完整质量属性和验收标准。

查看规格说明 →

高级数据

质检证书（CoA,COO,BSE/TSE 和分析图谱)

C of A & Other Certificates(BSE/TSE, COO):

输入批号以搜索分析图谱:

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批号(Lot Number)	证书类型	货号
ZJ26F0737870	分析证书	rp224201
ZJ25F0724922	分析证书	rp224201
ZJ25F0724921	分析证书	rp224201

技术文档和文章

rp224201_超快速t4 dna连接酶产品说明书.pdf

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