计算溶液所需的质量、体积或浓度。
,适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。
-20°C储存,避免反复冻融。超低温运输 。请查阅批次 COA 获取详细规格。
SDS、COA、产品数据表及规格说明书均可下载。可通过批号查询获取批次 COA。
在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。
逆转录反应温度:37℃-50℃
逆转录时间:15-30 min
荧光定量RT-PCR:√
cDNA Synthesis:√
推荐项目:RNA病毒定量、cDNA合成、RNA测序
临床应用:新冠肺炎
产品说明:
本制品可提供较其他逆转录酶更高的全长 cDNA 产量,具有更完整的基因代表性。 稳定的 cDNA 合成是基因表达研究的关键。不恰当的逆转录 (RT) 反应会降低 cDNA 产量,从而影响反应的灵敏性,或者会形成缩短的cDNA,产生假阴性结果。由于大多数逆转录酶的RNA 酶 H 活性很高且热稳定性较低,因此无法利用起始 RNA 稳定地生成具有完整基因代表性的cDNA。Super MMLV 逆转录酶在 50℃下具有更高的热稳定性和更长的半衰期。 此外,Super MMLV 的 RNA 酶 H 活性较低。如果您要获得最高的实时荧光定量 RT-PCR 和芯片实验的灵敏度,以及代表起始 RNA 的最高保真度的 cDNA ,那么您需要 Super MMLV 逆转录酶。
产品内容:
Super MMLV Reverse Transcriptase(Super MMLV)(200U/μl)
5×Super MMLV Buffer
Solution I(10×)
应用:
1)First-Strand cDNA 的合成。
2)cDNA Probe 的制备。
3)RT-PCR 反应以及 Real Time RT-PCR 反应。
纯度:
1)200 U的本酶和1μg的λDNA-Hind III在37℃下反应1小时,DNA的电泳谱带不发生变化。
2)200 U的本酶和1μg的Supercoiled pBR322 DNA在37℃下反应1小时,DNA的电泳谱带不发生变化。
3)200 U 的本酶和1μg的16S,23S rRNA在37℃下反应1小时,RNA的电泳谱带不发生变化。
使用方法:
Frist-Strand cDNA 合成的实验操作方法
a. 在无菌的RNase-free的离心管中配制以下体系:
2μl随机引物(10μM)或2pmol基因特异引物或2μl Oligo(dT)12-18 Primer;
10 pg–5μg总RNA或50-500 ng mRNA;
0.4μl dNTP Mixture(dATP, dGTP, dCTP and dTTP各25 mM);
补超纯水到10μl。
b. 65℃保温5min后迅速在冰上冷击至少1min以上。
c. 离心数秒钟使模板 RNA/引物的变性溶液聚集于离心管底部。
d. 在上述离心管中配制下列反转录反应液。
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e. 轻弹离心管,50℃保温30-60min,或随机引物的反应在37℃保温60min,其他引物的反应在42℃保温60min。
f. 80℃保温15min后冰上冷却,得到的cDNA溶液可直接用于2nd-Strand cDNA 的合成或者 PCR 扩增等,PCR扩增时cDNA溶液的使用量建议使用10μl。