名称：2-巯基乙胺-HCl（2-MEA 2-巯基乙胺-HCl（2-MEA）
分子式：C2H8ClNS C2H8ClNS 

分子量：113.61
cas # : 156-57-0
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简介
        2-巯基乙胺-HCl（2-MEA）是一种温和的还原剂，适用于选择性地裂解 IgG 重链铰链区的二硫键。几种常用的抗体连接或固定方法都是通过巯基（-SH）进行共价连接。在 IgG 分子中，半胱氨酸残基侧链硫原子间的二硫键对维持 IgG 的结构和功能非常重要。完全还原 IgG 中的所有二硫键可生成独立的重链和轻链，并使其抗原结合功能消失。不过，如果仅能裂解铰链区的二硫键，则可产生两种功能性半抗体，其巯基可用于交联或固定方法（图 1）。

        幸运的是，2-MEA 的性质非常温和，可在保留重链和轻链之间二硫键的同时，裂解 IgG 或 F(ab)2 分子重链之间的二硫键。这与其他二硫还原剂形成鲜明对比，如二硫苏糖醇（DTT）和 2-巯基乙醇（2-ME），它们会以几乎相同的速度裂解 IgG 分子中的所有二硫键。因此，在大多数情况下，只有 2-MEA 适合选择性地部分还原免疫球蛋白。乙二胺四乙酸是 IgG 还原反应中的重要成分。通过螯合二价金属阳离子，乙二胺四乙酸可防止氧化，帮助将巯基保持在还原形式。在有 EDTA 存在的情况下，IgG 铰链区生成的巯基相当稳定。在一项研究中，还原型 IgG 和 Fab' 中的巯基数量在有 EDTA 存在的情况下 40 小时后分别只减少了 7% 和 9%，而在无 EDTA 存在的情况下则分别减少了 63%-90% 和 15-25% 。

选择性还原 IgG 中铰链区二硫化物的步骤
        除 IgG 外，还可对以下方法进行修改，用于还原蛋白质、肽或其他分子。一般来说，蛋白质/肽的浓度不如 2-MEA 的绝对浓度和 EDTA 的存在重要。孵育时间和其他参数必须根据经验进行优化，以达到理想的部分二硫化物还原效果。注：结果可能因特定 IgG 和铰链区内二硫键的数量而异。

所需其他材料

        • 反应缓冲液： 含乙二胺四乙酸的磷酸盐缓冲液（PBS-EDTA）：20-100mM 磷酸钠、150mM 氯化钠、1-10mM 乙二胺四乙酸，pH 值 7.2。也可使用其他 pH 值的缓冲液，但必须包含 1-10mM EDTA。
        • 在反应缓冲液或其他含有 1-10mM EDTA 的兼容缓冲液中溶解 10mg/mL 的 IgG。
        • 培养箱或水浴平衡至 37°C
        • 足以处理所用样品量的脱盐柱

程序
        1. 向一个含有 6 毫克 2-巯基乙胺-HCl（即 50 毫摩尔 2-MEA）的小瓶中加入 1 毫升 IgG 溶液。注：如果起始 IgG 样品少于 1 毫升，首先将 6 毫克 2-MEA 溶于 100 微升反应缓冲液中，然后立即向每 10 微升样品中加入 1 微升 2-MEA 原液。
        2. 盖上盖子，充分混合以溶解 2-MEA，然后将反应混合物在 37°C 孵育 90 分钟。
        3. 将反应冷却至室温，使用脱盐柱将 2-MEA 与还原的 IgG 分离。用反应缓冲液（PBS-EDTA）预平衡脱盐柱，并用相同的缓冲液进行缓冲液交换。
        4. 按照脱盐柱的使用说明进行缓冲液交换。注意：确保去除的 2-MEA 足够用于还原 IgG 与硫醇反应试剂的反应。任何剩余的还原剂都应远远低于 IgG 的摩尔量，否则会在后续反应中成为重要的竞争者。

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