如果上一步骤基因表达的系列分析技术 SAGE cDNA是保存在-20°C 中的，那么此实验是在冰上缓慢解冻。

现代神经科学研究技术

作者：U.Windhorst & H. Johansson 翻译：赵志奇 陈军

操作方法

锚定酶消化cDNA实验

材料与仪器

溶液与缓冲液 引物
试剂盒 MPC-E PCR仪 Gene PulserII 型系统

步骤

实验方案 A

1.通过加入下列物质来消化双链 cDNA

2.在 37°C 下消化 lh。

3.65°C 孵育 20 min 热失活限制性酶。

4.等体积 PCI 抽提后乙醇沉淀（实验方案 A, 第 2 步)。

5.将冲洗风干的沉淀重新悬浮于 20 ul LoTE 中。

6.继续进行第 4 步

1.从试管中移去第二股链反应混合物，并用 50ul 洗液洗涤 1 次，然后移去洗液。

2.用 50ul 的 1x 限制性缓冲液洗涤试管 1 次

3.移去缓冲液，然后加入：

4.在 37C 下消化 lh。

5.通过在 65℃ 下放置 20 min 热失活限制性酶。

6.继续进行第 5 步。

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