抗体效价测定实验是用于检测免疫血清效价高低。目前用于测定抗体效价的方法主要有3种：试管凝集反应、琼脂扩散实验和酶联免疫吸附实验（ELISA）。

原理

ELISA 法测定抗体效价的基本原理是是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术（图 5-1）

操作方法

ELISA法测定抗体效价

原理

ELISA 法测定抗体效价的基本原理是是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。

材料与仪器

器材：酶标仪
试剂：
① 1x PBST（1 x PBS ＋ 0.1％ Tween 20）
② 酶标二抗
③ 包被缓冲液（0.1 M Na
2
CO
3
，pH 9.6）

步骤

ELISA 法测定抗体效价的基本过程可分为如下几步：

（1）将抗原稀释于包被缓冲液（0.1 M Na₂CO₃，pH 9.6）中，终浓度为 5 ng/μL，每孔加 100 μL，并设立空白对照（只加包被缓冲液），于 4 ℃ 包被过夜。

（2）用 1 x PBST（1 x PBS ＋ 0. 1％ Tween 20）于室温下洗涤 3 次，每次 5 min。然后每孔加 200 μL封闭液（10％ 的小牛血清溶于 1 x PBS 中），37 ℃ 封闭 1 h。

（3）1x PBST 洗涤 3 次。加入待测血清，血清样品按 1:1000，1:2000，1:4000……倍比稀释于抗体稀释液（5％ 的 BSA 溶于 1x PBS 中）中，每孔 100 μL，阴性孔加入 100 μL 1:2000 稀释的阴性血清，空白孔加入 100 μL 1:1000 样品血清。37 ℃ 孵育 1 h。

（4）1x PBST 洗涤 3 次，加入酶标二抗。酶标二抗按说明书，1:2500 稀释于抗体稀释液中，每孔 100 μL，37 ℃ 1 h ABTS 显色，每孔 100 μL，37 μL 15 min，至阴性孔显色时，酶标仪上 405 nm 处判读结果。

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