染料同时染色细胞，为鉴别凋亡细胞和坏死细胞提供较好的方法

原理

3，6-（二甲胺基）吖啶盐酸盐，分子式C17H19N3·HCl·ZnCl2，分子量438.12g/mo1，是一种荧光色素，其检测激发滤光片波长488nm，阻断滤光片波长515nm.它与细胞中DNA和RNA结合量存在差别，可发出不同颜色的荧光，与DNA结合量少发绿色荧光，与RNA结合量多发桔黄色或桔红色荧光。该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA和RNA染色。因此，在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体，吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光，或黄绿色碎片颗粒：而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。吖啶橙AO常与溴化乙啶EB合。

应用

检测细胞凋亡

操作方法

AO染色法（丫啶橙染色法）检测细胞凋亡

材料与仪器

【试剂】pH4.8～6.0 Tritionx-100的PBS缓冲液，
AO染料：将AO染料溶于含1%TritionX-100的PBS中，终浓度为6μg/ml，含Rnase100μg/ml，避光保存。
【仪器】荧光显微镜

步骤

制备活细胞悬液106 /ml；取95μl细胞悬液，加5μl的AO染液混合、避光作用10min；加入5ml PBS，1500r/min离心5min，弃上清，重复洗涤2次；重悬细胞，吸一滴滴于玻片上并用盖玻片封片；

注意事项

在荧光显微镜下，选用515nm激发光镜检：AO染色细胞DNA呈黄色或黄绿色。当细胞凋亡时，染色呈致密浓染的黄绿色荧光或见黄绿色碎片。

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