N-糖基化位点研究是理解糖链功能的重要前提之一

原理

应用

鉴定糖基化蛋白中N-糖基化位点

操作方法

生物药糖基化位点检测

材料与仪器

【材料】生物药

步骤

（1） 使用trypsin或其他适当的蛋白酶对样品进行酶切；（2） 选取合适的色谱柱对N-glycopeptides, O-glycopeptides及其他多肽进行分离；

（3） 脱糖基化处理；

（4） 通过MALDI-TOF MS, ESI-MS或MS/MS 对多肽图谱进行分析，找出糖基化的理论位置；

（5） 通过多肽图谱确定每一个N-/O-糖原的位点；

（6） 对不同批次样品的糖基化位点进行比对。

注意事项

在收取样品后首先对样品进行酶切，释放抗体的Fc domain和Fab，然后对糖基化片段进行分离，通过MALDI TOF MS或nano LC-ESI-MS/MS对糖基化位点进行确证。

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