对DNA进行甲基化检测

原理

用亚硫酸氢盐处理基因组DNA，所有未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不变；随后再CpG岛两端设计引物进行PCR，将目的产物纯化后进行TA克隆，每个克隆挑取阳性克隆测序，最后将测得的序列与原始序列比对，统计甲基化位点及数量，并分析甲基化程度。

应用

甲基化检测

操作方法

BSP克隆测序法

材料与仪器

【材料】DNA目标片段；
【试剂】亚硫酸氢盐；

步骤

基因组DNA制备亚硫酸氢盐修饰DNA纯化与回收PCR扩增产物克隆测序

注意事项

1、组织样本：-20℃或-80℃低温冰箱中保存，液氮或者干冰运输；市内或短途运输可冰袋运输。若提供的材料为新鲜组织、血液细胞等生物材料，请提供足够提取2ug以上基因DNA的材料量。 2、DNA样本：体积≥20ul，浓度≥100ng/ul，DNA总量≥2ug，20℃保存，低温冰袋运输。 3、血液样本：要求保存于抗凝管中或冻存管中，体积大于2ml，请用干冰运送，保证DNA不降解。 4、样品为石蜡包埋组织切片的，要求提供10张组织切片光片（面积>10mm×10mm,厚度约5-10um）

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