细胞计数法是细胞生物学实验的一项基本技术，在原代培养、传代培养、冻存及复苏等实验中，被广泛用来确定培养细胞生长状态及接种密度，此外，也是测定培养基、血清、药物等物质生物学作用的重要手段。

原理

细胞的计数实验的基本原理是利用细胞计数板可对细胞进行计数。

细胞计数板每一大方格长为 1 mm，宽为 1 mm，高为 0.1 mm，体积为 0.1 mm³，可容纳的溶液是 0.1 μL，那么每 1 mL 溶液中所含细胞数即是视野中每一大方格中数出的细胞数的 10000 倍。（如下图）

操作方法

细胞的计数实验

原理

细胞的计数实验的基本原理是利用细胞计数板可对细胞进行计数。细胞计数板每一大方格长为 1 mm，宽为 1 mm，高为 0.1 mm，体积为 0.1 mm3，可容纳的溶液是 0.1 μL，那么每 1 mL 溶液中所含细胞数即是视野中每一大方格中数出的细胞数的 10000 倍。（如下图）。

材料与仪器

器材：
① 盖玻片
② 吸管
③ 尖嘴吸管
④ 胶帽
⑤ 离心管
⑥ 酒精棉球
⑦ 酒精灯
⑧ 细胞计数板
⑨ 倒置显微镜
⑩ 超净工作台
⑪ CO
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培养箱
试剂:
① D-Hanks 液
② 0.25％ 胰蛋白酶液
③ DMEM 培养基

步骤

显微测微尺测量细胞显微大小实验基本过程可分为以下几步：
A. 用 75％ 乙醇棉球清洁计数板和盖玻片，用吸水纸轻轻擦干，用 10x 物镜观察计数板四角大方格，调节焦距使视野清晰后，将盖玻片盖在计数板两槽中间。
B. 用 0.25％ 胰蛋白酶液消化传代 7 d 的单层生长的成纤维细胞，制成单细胞悬液。
C. 用尖嘴吸管轻轻吹打细胞悬液，吸取少量悬液滴加在计数板上盖玻片一侧边沿。
D. 在显微镜下，用 10x 物镜观察计数板四角大方格中的细胞数，细胞压中线时，只计左侧和上方者，不计右侧和下方者。

注意事项

1. 细胞计数前，为了使结果更为准确，对细胞的消化要充分，使其尽量分散，以制备单细胞悬液。加样前应充分混匀细胞悬液，加样时应避免气泡的产生，加样量要适度，不要溢出盖玻片，也不要过少或带气泡。

2. 镜下计数时，遇到 2 个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算。如细胞团占 10％ 以上，说明消化不充分，需重制备细胞悬液、计数。

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