生存力分析用于检测潜在的损伤过程，如原代分离、细胞分离或冻融后活细胞的比例。多数生存力试验都是基于膜的完整性发生了破坏，这可通过染料的摄取来测定，这 种染料在正常情况下不能进入细胞（如台盼蓝、藻红或萘黑），或是正常时由活细胞摄 取并储留其间，此时被释放出来（如二乙酰荧光素或中性红）。然而，这种效应是瞬时的，并不是总能预示最终的存活。另外，染料排斥总是过高地估计了细胞的生存力，例 如保存在液氮中的细胞在融化后有 90% 可能排斥台盼蓝，但仅有 60% 的细胞在 24h后证明能够贴壁。来源：动物细胞培养：基础技术指南第五版

操作方法

方案22.1染料排斥法测定细胞生存力实验

原理

萘黑、台盼蓝以及很多其他染料[KahenbachetaL1958]均不能透过活细胞。将细胞悬液与染料混匀，在低倍显微镜下检査。

材料与仪器

胰蛋白酶
巴斯德吸管 显微镜 手执计数器 生存力染料 血细胞计数板

步骤

材料

无菌

受试细胞，如胰蛋白酶消化的贴壁细胞、融化冷冻的细胞或原代离散的细胞
合适的生长液 20ml
0.25% 胰蛋白酶 5ml
D-PBSA10ml

非灭菌

血细胞计数板
生存力染料 1ml (如用D-PBSA 或HBSS 配制的 0.4% 台盼蓝或 1% 萘黑）
巴斯德吸管
显微镜
手执计数器

操作步骤

1. 用胰蛋白酶消化或离心与重悬，制备高浓度的细胞悬液（约1X10⁶ 个/ml)。

2. 取一块干净的血细胞计数板，将盖玻片间定在适当位置上（见方案 21.1 和 图 21.1)。

3 . 将一滴细胞悬液和一滴（台盼蓝）或四滴（萘黑）染料混匀。

4 . 加至血细胞计数板的计数室中（见方案21.1)。

5 . 静置1～2min (但不要放置很久，否则活细胞会受到损伤而吸收染料）。

6 . 将计数板置于显微镜下，选择10X 物镜，利用网格线聚焦（图21.1)。
7 . 计数细胞总数以及着色细胞数。

8 .清洗血细胞计数板，放人盒内。

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