活细胞可以摄取二乙酰荧光素，并将它水解成荧光素，荧光素不能透过活细胞的细胞膜[Rotman and Papermaster，1966]。活细胞发出绿色荧光，而死细胞则不能。没有生存力的细胞也可能被碘化丙啶染色，随后发出红色荧光。细胞生存力可以用 发绿色荧光的细胞的百分数来表示。该方法可用于CCD分析或流式细胞仪（见21.7.2节)。来源：动物细胞培养：基础技术指南第五版

操作方法

方案22.2染料摄取法测定细胞生存力实验

原理

细胞悬液用碘化丙啶和二乙酰荧光素的混合液染色，用荧光显微镜或流式细胞仪检测。

步骤

材料

无菌

单细胞悬液
双醋酸荧光素，10ug/ml，溶于 HBSS
碘化丙啶，500ug/ml

非灭菌

荧光显微镜
滤光片
荧光素：激发 450/590 nm ，发射 LP 515 nm
碘化丙啶：激发 488nm ，发射 615 nm

操作步骤

1. 细胞悬液的制备与染料排斥法相同（见方案 22.1)，但是生长液中不含酚红。
2. 以 1 : 10 的比例加入荧光素染料混合液，二乙酰荧光素的终浓度为 l ug/ml，碘化丙啶的终浓度为 50ug/ml。 :
3. 将细胞置于 37°C , 温育 10 min。
4. 将一滴细胞滴在载玻片上，盖上盖玻片，用荧光显微镜观察。

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