动物细胞培养：基础实验指南

由于鸡胚比同期的小鼠胚胎大，故较易分离。与小鼠胚胎一样，鸡胚可提供间充质细胞原代培养，用于细胞增殖分析，用作饲养层细胞，并可作为病毒繁殖的基质。由于鸡胚体积较大，故也较易分离出单一器官以产生特殊类型的细胞，如肝细胞、心肌和肺上皮细胞。应用鸡胚也要符合动物法规（ 例如在英国），使用超过孕期一半的胚胎要有许可证

操作方法

方案12.2分离鸡胚实验

原理

无菌操作从蛋中取出鸡胚放入培养皿中。

步骤

材料：
无菌材料
DBSS: 取材用 BSS(含有高浓度抗生素的 BSS，见附录 I)，装在 25〜50 ml 的螺口试管或通用容器内
BSS：50 ml 盛于无菌烧杯中，用于冷却烧过的器械
20〜50 ml 小烧杯或蛋杯
直头和弯头镊子
9 cm 皮氏培养皿
 
非灭菌材料
孵化 10 天的受精卵
70%乙醇
棉签

孵箱（非 C02)

操作步骤

1. 在湿润的环境中于 38.5℃：条件下孵卵，每天转动 180°，然鸡卵孵育也需要 20?21 天，但它们的发育阶段不同于鼠胚。分离整个胚胎进行细胞培养，需在大约第 8 天时进行。若分离器官则大约在第 10?13 天（在英国第 10 天是要许可证的最后期限）。

2. 用 70% 乙醉棉签消毒鸡卵，钝端向上放于小烧杯内（图 12.4a）。

3. 用无菌镊打破卵壳（图 12.4b）, 剥离卵壳直到气旗的边缘（图 12.4c）。

4. 重新消毐镊子后（浸入乙醇，烧干乙形，于无菌的 BSS 屮冷却）用镊子剥离白色的壳膜，露下面的绒毛嵌丧膜（CAM）及血管（图 12.4d、图 12.4e）
 

5. 用弯镊子刺破绒毛尿褒膜（图 12.4f），轻轻夹住头部下方，提出胚胎（图 12.4 g、图 12.4 h），不要完全闭合镊子，避免颈部被切断，将中指垫在镊子下，用它限制食指的压力（图 12.4 g）。

6. 将鸡胚放入直径 9 cm 含 20 ml DBSS 的培养皿中（图 12.4i），等待进一步解剖和培养（见方案 12.7）。

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