利用 ABIPRISMRigDye 末端化学法进行自动荧光测序是高效率 DN 八序列测定的方法之一。序列梯度是由标准的 Sanger 方法利用荧光标记链末端的核苷而产生的。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。

操作方法

染色末端的清洁纯化实验

材料与仪器

乙醇 洗脱上样液
磁性分离装置 平板夹 平板架 测序反应纯化系统

步骤

一、材料

1. 缓冲液、溶液和试剂

用于测序的胶洗脱/上样液 (见表 9-4)

90% 乙酵洗涤液

2. 特殊设备

MagnaBotⅡ磁性分离装置（Promega)

平板夹 96(Promega)

平板架（Promega)

3. 其他

WizardMagneSil 测序反应纯化系统（Promega; 包括 MagneSilGREEN[顺磁性顆粒])

96 孔板

二、方法

1. 将 96 孔板装到平板夹 96 中 [图 9-10(a)、（b)]。

2. 使用平板架 [图 9-10(c)] 将平板放置在自动机械工作台上。

3. 剧烈振荡瓶以重悬 MagneSil 顆粒，每 20ul 测序反应体系中加入 180ulMagneSil颗粒。

4. 室温下温育 5 min, 期间分别在 0、2.5 min 和 5 min 时进行抽吸混合。

5. 将板放到 MagnaBotⅡ磁性分离装置 [图 9-10(d)] 上以捕获颗粒。

6. 移弃液体，避免损失任何颗粒。

7. 从 MagnaBotⅡ设备上取出板，置于平板架上。

8. 每个样品中加入 100ul90% 的乙醇。

9. 室温下温育 5 min, 期间分别在 0、2.5 min 和 5 min 时进行抽吸混合。

10. 将板放到 MagnaBotnⅡ磁性分离装置上以捕获颗粒。

11. 移弃液体，避免损失任何顆粒。

12. 重复步骤 7~11 使总洗涤次数达到 2 次。

13. 顆粒在室温下风干约 10 min。

14. 加适量洗脱/上样液（表 9-4)。

15. 室温下温育 1~2 min。

16. 将板放到 MagnaBotnⅡ磁性分离装置上以捕获顆粒。

17. 将已纯化的测序反应体系转移到干净的 96 孔板，小心以避免损失任何顆粒。

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