多重 PCR
多重 PCR (multiplex polymerase chain reaction, MPCR) 也称复合 PCR,是在常规 PCR 基 础上改进并发展起来的一种新型 PCR 扩增技术,即可在一个反应体系中加入两对以上引
以下是知识库中与该主题相关的实验方案、常见问题、指南与技术文章。
多重 PCR (multiplex polymerase chain reaction, MPCR) 也称复合 PCR,是在常规 PCR 基 础上改进并发展起来的一种新型 PCR 扩增技术,即可在一个反应体系中加入两对以上引
Wizard Magne Sil 基因组 DNA 纯化系统是使用一种固相顺磁性硅质顆粒来纯化基因组 DNA。该技术取代了以真空过滤和离心为基础的 DNA 纯化形式,而且还使样本处理更加经济、
硅化学法已成为从小鼠尾剪取物、动物组织和组织培养细胞等样品中纯化高质量基因组 DNA 的方法之一。Wizard SV 基因组 DNA 纯化体系是利用一个充有固相硅的滤膜来纯化 基因
用于从全血(10 ml) 中分离基因组 DNA 的 Wizard 基因组 DNA 纯化试剂盒建立在一个四步程序基础上的。纯化程序的第一步包括血红细胞的裂解、可溶部分的弃除,随后是白细胞
电泳之前纯化测序反应产物以去除多余的、尚未结合的染料终止子是非常必要的。离心柱可以是快速、有效地去除未结合的染料终止子。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作
要得到合适的信号强度,可根据 DNA 片段的大小调节 DNA 的用量。适用于 ABI PRISM Big Dye Terminator Ready Reaction mix(Applied Biosystems) 和 GeneAmp PCR System9700
用 10 对不同的引物扩增约 5kb 的片段,模板 DNA 是一样的,反应体系是 50ul, 对照中未加模板,含有单一引物。对于循环数较多(25〜40) 的反应,一般应设置一个没有模板或
下面的程序详细叙述了高 GC 含董片段的 PCR 扩增。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。
聚合酶链式反应-单链构象多态(Polymerase Chain Reaction-Single Strand Conformation Polymorphism,PCR-SSCP)技术可用于:(1)癌基因和抑癌基因突变的筛查检测;(2)
限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism,RFLP)分析技术是分子生物学的重要分析方法之一 ,主要用于(1)检测DNA序列多态性,(2)探索基因的多
在 PCR 扩增过程中将 dUTP 掺入复制子是最为有效和广泛使用的净化 PCR 产物的方法(Longoetal.1990;HartleyandRashtchian1995)。下面介紹这一方法的详细操作过程。本实验来
引物延伸分析用于确定位置和定量特定RNA的5'-端的数量。结束标记的寡核苷酸杂交,RNA和利用中存在的脱氧核苷酸逆转录作为底漆。因此RNA的反转录成cDNA,变性聚丙烯酰胺凝胶
介绍一个采用 AmiconMicrocon-PCR 滤件(Millipore) 的方法,有效地去除冗余dNTP 和引物的方法纯化 PCR 产物。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。
Wizard SV 胶和 PCR 纯化系统是利用硅基法从琼脂糖凝胶中或从 PCR 扩增反应混合物中直接纯化 PCR 片段的方法。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。
测序之前对模板精确定量至关重要。根据 DNA 用量的多少,有几种不同的方法可供选择。下面介绍另外两种方法:荧光测定法和比较溴化物染色法。本实验来源于 PCR 实验指南(第
对于一个新的靶分子建立实时 PCR 定量分析的过程包括:①设计步骤一 PCR 引物和探针的选择;②根据特定分析的要求,选择实时 PCR 的检測方法。使用 SYBRGreen 的实时 PCR
第一部分:竞争子的设计;第二部分:竞争子RNA的合成、纯化和定量。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。
已知线性范围的循环参数和 18SrRNA 引物与竞争子的比例,就可以用自己的样品去做相对定量 RT-PCR。下面配制的 PCR 反应混合物包含 9 个反应(4 个样品、4 个非反转录对照、
这个方案的目的是要选择一个 18SrRNA 引物和竞争子之间的恰当比例,可以模仿目的转录本的表达量。对于大多数转录本来说,一般比例为 3:7。对于模板比较稀少的,采用2:8 或
RNA 样品可以在-80°C 中保存 6 个月。总细胞 RNA 采用 StratageneRNA 提取试剂盒,按照说明书进行。另外,也可选用 PicoPureRNA 提取试剂盒,尤其是细胞较少时。本实验来
LCM实验对(1)切片的病理分析(2)病变程度的分析(3)临床样本收集与参考等都有应用。
以下概述的是 ConcertPlant 试剂(Invitrogen) 所附带的方案。该方案不是以酚为基础的,但需要加氯仿。该试剂用于多种植物的组织中分离 RNA, 包括蓝叶云杉针、马铃薯块茎、
Wizard SV96 PCR 纯化系统提供了一个以膜为基础,用于从 96 孔板中进行高产率 PCR纯化的方法。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。
本方法运用 PlatinumQuantitativePCRSuperMix-UDG。进行实时 PCR 时,应该有一套设备可以检测每次 PCR 循环时释放的荧光信号。并且还能检測 FAM 和 JOE 激发后分别释放出的
MagneSil 是一种顺磁性硅质顆粒,能够充当可移动的固相物质而用于捕获双链 DNA 片段。通过洗涤黏附于硅质顆粒上的靶复合物来去除残留污染,从而纯化的目的 DNA。本实验来源
该方案是由 Godfrey 等改进 Fisher 的方案发表的。此前已有从固定组织中纯化 RNA 的方案发表。Ambion 和 Roche 发明了从石蜡包埋的组织中纯化 RNA 的商品化试剂盒。本实验
RNA 分离的酚基试剂的生产以 Chomczynski 方案为基础。这些方案在从富含 RNA 酶的组织如胰腺中获取 RNA 时最有用。这里介绍的是随 Invitrogen 的 Trizol 试剂出售的方案的
本实验利用 Ambion 的 MicroPoly(A)Pure 试剂盒分离 mRNA 。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。
为了获得较好的结果,应当用新鲜的组织,因为在-80°C 中保存超过 24 h 的样品,其RNA 的产量和完整性将大打折扣。尽管有几个实验小组曾经报道用 LCM 技术从石蜡包埋的组织
下述方案是经修改过的 Trizol 方案,用于从植物组织中分离 RNA,其中增加了一个高盐异丙酵沉淀步骤,以选择性地沉淀 RNA,而将多聚糖和蛋白多糖留在溶液里。本实验来源于 P
该方案可用于使用硅基 RNA 结合柱的 RNA 分离策略,例如方案 6。然而,可能不会 实现 100% 除去 DNA。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。
在进行 LCM 之前,切好的组织样品要固定、染色,必需的话还要脱水。对内脏和淋巴结组织作者采用经典的 HE 染色。一旦片子准备好,LCM 应当在 45 min 内进行。所有的试剂、
由 Marligen Biosciences 提供的 Rapid Total RNA System 可从各种样品中提取 RNA,且产量和质量非常稳定。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。
本方案利用的是总RNA,因为如果使用18SrRNA作内对照,在后续实验中就不能使用带poly(A)的RNA。并且必须用DNA酶处理RNA,以去除所有污染的基因组DNA。本实验来源于 PCR 实验
在预实验中,对样品和竞争子应分别做反转录,然后,不变的这种样品反转录产物的量与竞争子反转录产物 2 的对数倍稀释的量相结合,用于 PCR,这种方法可以确定样品的最适拷
利用 ABIPRISMRigDye 末端化学法进行自动荧光测序是高效率 DN 八序列测定的方法之一。序列梯度是由标准的 Sanger 方法利用荧光标记链末端的核苷而产生的。本实验来源于 PCR
下述方案是 Dilworth 和 Huang 方案的修改(DilworthandMcCarey1992;Huangetal.2000)。它可以用于从大多数商用试剂盒和试剂制备的 RNA 中去除 DNA 污染。本实验来源于 PCR
LUX 引物用 FAM(6-羧基荧光素)或 JOE(6-羧基-4',5'-二氯-2',7'-二甲氧基荧光素)标记。在没有特异模板的反应中,LUX 引物可以对 100 个拷贝或更少的目的基因进行定量,
这种方法源自于对 Chirgwin 等(1979) 所拟方案的修改。对 Chirgwin 等所规定的试剂,许多试剂盒中常用,且用于分离和纯化 RNA 的试剂也是常见的。本实验来源于 PCR 实验指
对于高通量的筛选,推荐使用几个热循环仪厂家提供的 96 孔或 384 孔 PCR 板,或者使用单个的管子。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。
在本方案所描述的反应中,差异 DNA 被选择性地扩增。每个实验至少应该有 4 个反应:①已消减的检测 DNA;②未消减的检测者对照(1-c);③反向消减的检测 DNA;④反向未消减的
实验介绍消减杂交,本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。
本实验介绍使用 HC ExpressArray Kit 进行杂交与检测的方法。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。
可以用各种方法分离基因组 DNA, 主要决定于初始材料的种类(血液还是组织)和数量。所有制备的 DNA 都应该储存于 pH8.0 的 TE 缓冲液中并装在灭菌的 Eppendorf 管内。本实
应用经过修改的 Miller 等(1988) 的盐沉淀方法纯化 DNA,不使用酚和氯仿,比较温和,有效防止了长的染色体 DNA 的断裂。在第 9 章中讲述了另一种 DNA 纯化的方法。这种方
多元实时 PCR 时,在一个反应管中加入不同标记的成对引物,从而可以同时分析多个不同的基因。在许多反应中,用 JOE 标记看家基因对模板定量,用 FAM 标记目的基因,证明 LUX
下面 4 个探针用于差异筛选杂交。 1. 检测者特异性消减探针(正向消减探针)。 2. 驱动者特异性消减探针(反向消减探针)。 3. 从检测者 mRNA(或检測者基因组 DNA) 直接合
在优化实验条件时,应该同时用含有甘油和不含甘油的凝胶分离PCR产物,并对放射性自显影的结果进行比较。利用这两种凝胶分析同一种样品的预实验结果可以在24h之内获得。一旦
本方案描述了通过 PCR 扩增产物,来制作 cDNA 微阵列的实验步骤。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。
这一部分介绍了一种原位 PCR,特别是逆转录酶原位 PCR 的简略方法。详细讨论了其中的每个实验程序。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。
SSH 的主要缺点是,在消减文库中存在代表非差异表达 DNA 种类的背景克隆。在某些情况下,背景克隆的数量可能大大超过目的克隆。为了克服这个问题,推荐镜像方向选择(MOS)。
本实验介绍激活的热稳定 DNA 聚合酶进行反转录和 DNA 扩增。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。
一次双向消减,需要总量为 2ug 的基因组 DNA 或 cDNA。大多数分离 RNA 和基因组DNA 的方法都适用于本实验(Sambrooketal.1989;ChomczynskiandSacchi1987;Farrell1993)。本
cDNA 合成反应的体积,依赖于所用的锚定-任意引物组合的数目。下面提供的方案,适用于 24 个引物组合和两个样品。对于更多的样品和/或更多的引物组合,调整相应主体混合液
为了进行 FDD 基因表达的分析,以及使用任何其他基于 RNA 的基因表达技术,在反转录合成单链 cDNA 和后续的 PCR 操作之前,必须除掉污染的基因组 DNA。本实验来源于 PCR 实
对 SSCP 解析能力和局限性的系统分析揭示灵敏度和片段长度有显著的相关性。当DNA 长度为 150~200bp 时,突变的检出率最高。本方案应用了高专一性的放射性同位素,并且包含
是对差异显示技术(DD)实验和基因表达系列分析实验中实验方案A和B的补充实验 现代神经科学研究技术 作者:U.Windhorst & H. Johansson 翻译:赵志奇 陈军
是对差异显示技术(DD)实验和基因表达系列分析实验中实验方案A和B的补充实验 现代神经科学研究技术 作者:U.Windhorst & H. Johansson 翻译:赵志奇 陈军
通过让两个互补的引物退火构建接头,首先应使引物 1B 和 2B 的 5'末端磷酸化。 现代神经科学研究技术 作者:U.Windhorst & H. Johansson 翻译:赵志奇 陈军
本实验介绍凝胶纯化的方法。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。
这种 PCR-SDM 方法的要点包括如下几个方面。1. 使用的模板浓度有所增加,这样就可以减少循环数,因此减少了非特异产物扩增的可能性。2. 加入了 Taq Extender, 扩增较长的 P
诱变 PCR 最大的优势是以一种没有偏好的方式引入了各种类型的突变,而不是获得高水平的单一的扩增。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。
本实验介绍顺磁性链霉抗生物素蛋白珠子的纯化。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。
许多载体及其衍生物被开发出来用于克隆 PCR 产物,其中包括典型的 pBluescript 类载体。它们具有多克隆位点和简化的多克隆位点,PCR-Script Direct 质粒也是这样。简化的多
在该方案中,用限制性内切酶的混合物处理人类基因组 DNA(内切酶混合物的识别位点为 4bp),产生大概 50〜500bp 的片段。最终使用这一类型的表达文库,是通过利用表型的和生
这里介绍的方法,是用一个生物素化的引物来帮助纯化第一链产物。这些纯化技术是可以互换的。与之类似,使用这里所介绍的基于寡核苷酸-(dT) 的引物,在反转录的起始阶段使用
这一实验方案分为 3 个阶段。 第 1 阶段:反转录产生 cDNA 模板 ;第 2 阶段:在第一链 cDNA 产物末端加 poly(A) 尾 ;第 3 阶段:扩增。本实验来源于 PCR 实验指南(第二
从丙烯酰胺凝胶上切下潜在的差异表达 cDNA 之后,用同一种锚定-任意引物组合重新扩增 cDNA, 反应条件与最初 PCR 相同。重新扩增的产物,可以进行克隆和测序,以供进一步分
本方案设计为 24 个 PCR 反应,使用 3 种 cDNA 亚群(利用方案 3 中的 H-T11M 引物进行 RT 反应),引物为荧光染料标记的锚定引物(FH-T11M) 与 24 种上游任意引物 (HAP)
是对差异显示技术(DD)实验和基因表达系列分析实验中实验方案A和B的补充实验 现代神经科学研究技术 作者:U.Windhorst & H. Johansson 翻译:赵志奇 陈军
本实验介绍插入片段的准备工作。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。
本实验介绍关于PCR 组装反应的过程。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。
这个方案只是用 RNA 酶处理 PCR 产物的一种方法。有很多可选择和有效的途径来纯化 PCR 产物以除去引物,接着用酶处理 PCR 产物,然后再除去酶。值得注意的是用 PCR仪设置温
使用合成的寡核苷酸构建文库时,PCR 有两个重要的作用。第一,用与特定侧翼序列退火的引物来扩增文库,仅用少量的不同模板,就可以得到大量的 PCR 产物。第二,若要产生文
这一实验方案分为 6 个阶段。第 1 阶段:降解 RNA 的去磷酸化; 第 2 阶段:完整 RNA 去帽; 第 3 阶段:RNA 寡核苷酸的制备; 第 4 阶段:RNA 寡核苷酸与细胞 RNA 的连接; 第
本实验介绍胰岛素受体对胰岛素亲和性的测定方法。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南,作者:朱厚础。
本实验介绍如何定制 40bp 寡核苷酸的过程。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。
为了确认所选择 cDNA 确实是差异表达的,建议使用 Northern 印迹分析,而不要用其他的确认技术,比如反向 Northern 杂交(Zhangetal.1996) 或定量 RT-PCR。本实验来源于 PC
该方案中,用 PCR 分析由质粒载体编码的随机多肽文库。该文库是由连接反应的产物转化细菌后得到的,方案 2 已经介绍过,然后再用标准的程序对质粒进行扩增和纯化。本实验来
本实验介绍用经典 RACE 扩増 3'末端 cDNA 的方法。PCR 实验指南,章节25.4,方案1
是对差异显示技术(DD)实验中标签酶技术的补充 现代神经科学研究技术 作者:U.Windhorst & H. Johansson 翻译:赵志奇 陈军
菌落 PCR 分析克隆的重组体实验可应用于:(1)分析由转化细胞产生的菌落是否含有重组插入片段;(2)鉴定插入物的存在和方向。
本实验介绍基于 PCR 的 DNA 文库筛选方法。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。
由 PCR 产生的合成 DNA 文库,可以经过酶切消化,连接到线性化的表达载体系统上。在这里所列的方案中,文库的 5’(NotⅠ)和 3'(ClaⅠ) 末端是不同的酶切位点,也用同样的
迄今为止,基因只是被用来在细菌中表达,因此不知道这种简单的策略是否也能在更高等的植物的转基因中发挥作用。在 CAPITALS 中的软件程序来自 DNALYSIS 软件的 DOS Compuge
本实验介绍PCR产物制备克隆的方法。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。
本实验介绍关于通过重叠延伸和基因 SOEing 进行 PCR 突变的过程。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。
是对差异显示技术(DD)实验和基因表达系列分析实验中实验方案A和B的补充实验 现代神经科学研究技术 作者:U.Windhorst & H. Johansson 翻译:赵志奇 陈军
PCR(Polymerase Chain Reaction)即聚合酶链式反应是1986 年由Kallis Mullis 发现。这项技术已广泛地应用于分子生物学各个领域,它不仅可用于基因分离克隆和核酸序列分析
部分分解多肽氨基酸序列 20 个左右残基长度,用编码多肽两端的 PCR 引物进行 PCR 反应,能够检测 PCR 产物的长度,用此法得到的 cDNA 只有几十个碱基对,但它将成为后续筛
对应于 mRNA 的 DNA 序列,可以被回收、克隆、测序,可以用作杂交或筛库的探针。来源:《精编分子生物学实验指南(第五版)》
AFLP可用于:(1)构建遗传连锁图谱;(2)利用AFLP快速鉴别与目的基因紧密连锁的分子标记;(3)AFLP辅助的轮回选择育种;(4)研究基因表达与调控;(5)分类和进化研究
免疫PCR (Immuno PCR, Im-PCR) 是利用抗原抗体反应的特异性和PCR扩增反应的极高灵敏性而建立的一种微量抗原检测技术。是用一段已知DNA分子标记抗体作为探针,用此探针与待
双重PCR-毛细管电泳法检测大豆转基因可应用于快速检测抗草甘膦转基因大豆。
是对差异显示技术(DD)实验和基因表达系列分析实验中实验方案A和B的补充实验 现代神经科学研究技术 作者:U.Windhorst & H. Johansson 翻译:赵志奇 陈军
PCR 是指在 DNA 聚合酶催化下,以亲代 DNA 为模板,以特定引物为延伸起点,通过变性、退火、延伸三步骤循环,在体外复制出与模板 DNA 序列互补的子链 DNA 的过程,能快速特
随着转基因农作物的大量种植,其安全性问题也日益受到人们的重视。2002年我国要求对转基因农作物实行标签管理。抗草甘膦(glyphosate)大豆 (商品名,roundup ready soybe
是对差异显示技术(DD)实验和基因表达系列分析实验中实验方案A和B的补充实验 现代神经科学研究技术 作者:U.Windhorst & H. Johansson 翻译:赵志奇 陈军
PCR 序列特异性引物分析法可以用于:(1)特异识别特定等位基因的引物通过PCR 扩增检测序列多态性。(2)检测MN 基因型。
聚合酶链式反应简称PCR(英文全称:Polymerase Chain Reaction)(又称:多聚酶链式反应),聚合酶链式反应,是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,由高温变性、低温退火
TA克隆 系统可以用于快速地、一步到位地把PCR 产物直接插入到质粒载体的多克隆 位点(MCS)中。
PCR法检测乙肝病毒(HBV)主要用于对病毒性肝炎的诊断、疗效观察及预防研究工作。
定量甲基化特异性 PCR(quantitative methylation specific PCR, qMSP)是一种用于检测 DNA 甲基化程度的分子生物学方法,可测定 DNA 特定位点甲基化状态的百分比,适用于
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DNA 序列的化学合成为基因在异源系统中的高水平表达和功能研究提供了强有力的工具。近年来,已经发展了许多 DNA 序列的合成和收集的方法。 早期的方法主要是酶的连接和 Fok
2005 年,Margulies 等人在「Nature」上发表文章介绍了一种快速简单的测序方法:即以 DNA 扩增的乳胶系统 (emulsion system) 和皮升大小焦磷酸 (pyrophosphate) 为基础的测
同源一步荧光等位基因特异性 PCR,是利用含有大量吸收单元的水溶性共轭聚电解质(water-soluble conjugated polyelectrolytes,CP),激发能量沿着 CP 的骨架转移到发色团
简单等位基因辨别 PCR,在基于扩增阻碍突变系统(amplifi-cation refractory mutation system,ARMS)原理的基础上设计引物,如果引物和对应的非靶 向模板之间配对,那么在
数字PCR (digital PCR)是将传统PCR的指数倍信号转换成线性的数字信号,通过特定的 仪器读值,并利用统计学方法来分析PCR产物。目前用于数字PCR的方法主要有1种:普通数字 P
常规的 PCR 扩增需要进行细菌培养、质粒制备等多步操作后才能进行基因扩增,操作繁琐, 耗时较长,同时在反复的操作中 DNA 量损失也较大,产率较低。在 1989 年 Gussow Cla
反转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级,使一些极为微量的RNA样品分析成为可能。 该技术主
原位 PCR(in situ PCR)就是在组织细胞里进行PCR反应,它结合了具有细胞定位能力的原位杂交和高度特异敏感的PCR技术的优点,在分子和细胞水平上检测特定的基因组序列、转
低温变性共扩增 PCR,是不管突变存在于什么位置,均能从野生型和含突变的序列的基因混合物中选择性扩增出为数不多的等位基因的方法。目前,用于低温变性共扩增 PCR 的方法
融合 PCR 是通过 PCR 的方法,将两段 DNA 序列连接到一起,处于相邻位置。一般来说, 融合 PCR 设计的引物序列的 5』端和 3'端各包含一段待融合的模板序列,这条引物相当于
定量PCR是指以一种标准作对照,通过对PCR终产物的分析或PCR过程的监测,对PCR起始模板量进行定量的技术。 根据原理的不同,目前主要采用的定量PCR方法包括极限稀释法、设立
单细胞PCR利用流式细胞技术可以分 离出某个特定类型的细胞。利用单个细胞可以在DNA 或mRNA水平上进行PCR分析,从而找到单个细胞内 的分子改变情况。目前,应用于单细胞PCR
PCR 因具有较高的特异性和可靠性,被广泛应用于遗传检测、亲子鉴定、血液筛査、临床 诊断中,除此之外,PCR 技术也是分子生物学研究领域中非常有用的工具。但是 PCR 技术也
甲基化特异PCR (methylation-specific PCR,MS-PCR) 是一种特异位点甲基化检测技术,是研究 DNA甲基化最为常用且准确度较高的方法之一。目前用于甲基化特异PCR的方法主要有
L-DNA 标记的等位基因特异性 PCR,是将等位基因特异性 PCR 与 L-DNA 标记的 PCR 结合起来。L-DNA 标记的 PCR 扩增的 DNA 是带有序列确定的 L-DNA 标签。L-DNA 是自然存在的
自从 Sanger 等 (1975) 引入双脱氧核昔三磷酸 (ddNTP) 作为链终止剂,DNA 序列测定技术得到迅速发展。目前,用于 PCR 测序的方法主要有 2 种:直接测序法和循环测序法。
等位基因特异性 PCR,也称错配 PCR(mismatch PCR), 扩增耐突变系统(amplification refractory mutation system,ARMS), 错配扩增突变分析(mismatch amplification m
PCR-变性梯度凝胶电泳,是把 30~50 个 GC 碱基组成的核苷酸链加在其中一条引物的 5' 端,通过 PCR 扩增目的基因,使扩增产物的一端含有 GC 碱基即 GC-clamp。由于 GC-clamp
单分子 PCR,又称 homo-primer PCR,是一个 DNA 分子为模板,循环数无限的 PCR 技术。PCR 技术发展到今天,已经相当成熟,并衍生出许多新技术,如 RT-PCR、 RAPD、AFLP、
实时定量 PCR( qPCR ) 于 1996 年由美国 Applied Biosystems 公司首先推出。传统 PCR 方法可对特定 DNA 片段进行指数级的扩增,并可以通过凝胶电泳的方法对扩增产物进行定
实时荧光定量 PCR-FP
当今,PCR 技术已成为分子生物学领域一种有力的研究工具,应用于现代分子生物学各个方面。人们发明各种各样 PCR 方法来克隆基因,因而在基因克隆和载体构建上,PCR 技术得
PCR-单链构象多态性是依据这种DNA单链构象特性,结合凝胶电泳技术,以检测基因变异的技术。目前,应用于PCR-单链构象多态性的方法主要有1种:PCR-单链构象多态性。
PCR技术可用于:(1)检验感染性疾病是否处于隐性或亚临床状态;(2)有效检测癌基因的突变,准确检测癌基因的表达量;(3)临床应用于检测地中海贫血的基因突变。
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