介绍一个采用 AmiconMicrocon-PCR 滤件（Millipore) 的方法，有效地去除冗余dNTP 和引物的方法纯化 PCR 产物。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。

操作方法

PCR产物纯化实验

材料与仪器

TE 或去离子水 PCR 产物
离心机和转子 PCR 滤 件 微量离心管

步骤

一、材料

1. 缓冲液和溶液

TE(lOmmol/L Tris-HCl，lmmol/L EDTA，pH7.5) 或去离子水

2. 核酸和寡核苷酸

待测序的 PCR 产物

3. 离心机和转子

带有固定倾角转子的小型离心机，如 Eppemlorf5415C

4. 特殊设备

AmiconMicrocon-PCR 滤件（Millipore) 或者相当的产品，微董离心管或接收管

二、方法

1. 对每一个待纯化的 PCR 产物，都在接收管中放置一个滤件，滤件的储液面向上

储液池中加入 400ul 去离子水或 TE，注意加样时不要触及膜。加入 100ulPCR 产物，避免带进矿物油。如果 PCR 产物不足 100ul, 用去离子水或 TE 补足，盖上盖子。

2. 将 1 中所得组合体用带有固定倾角转子的离心机，l000 g 离心 15 min(例如，Eppendorf5415C 离心机上 3300r/min)。注意盖子和管的结合部朝向转子的中央。

3. 移去滤件，将其放入一干净的收集管中，有膜面朝上（如果愿意，滤件可以一直

存到样品分析结束）。在滤件上小心地加 20ul 去离子水或 TE，注意不要触及膜，然后将滤件反转过来，放回到干净的收集管中，使带有液体的一面朝下。

4.1000 g 离心 2 min, 收集纯化的片段。

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