补体测定就是指测定总补体溶血活性，用于检测各种急性炎症。

操作方法

溶血试验（CH50）法

材料与仪器

血清
磷酸盐缓冲液 生理盐水 NaCl Na2HPO4 KH2PO4 硫酸镁溶液
水平离心机 水浴箱 分光光度计

步骤

一、材料准备

1.  浓度为1×10 g/ml 的绵羊红细胞配制 （1）取经稀释洗涤后的绵羊红细胞配成较5%稍浓的细胞悬液。 （2）取50%细胞悬液1ml，加于14ml蒸馏水中测值为 。按下式求出于一定体积的5%细胞悬液中应加入稀释液的毫升数。
     Vi为配制的50%细胞悬液体积，Vf为于一定量5%细胞悬液中应加入稀释的ml数：Ds为已知标准化的1×100个细胞/ml 悬液的OD₅₄₀值─0.385。   2.  致敏绵羊细胞 取绵羊红细胞悬液（1×10²/ml）加等量的溶血素（2 U/ml）。充分混合。置37℃水浴中作用30分钟，每隔10分钟摇动一次以免细胞下降即成5×10⁸/ml致敏羊红细胞。
二、操作步骤

1.  补体CH50单位测定   （1）  按下表加样：  
  （2）将各管充分混合。置37℃水浴中60分钟（摇动1~2次，以免红细胞下沉。）
（3）从水浴中取出后，立即将各管以2000转/分离心10分钟，将各管上清液分别移于另一试管。
（4）测定各管上清液OD值（波长=540 nm）
2.  补体CH50单位的计算
（1）从测定管（第1~5管）及溶血对照管（第6管）的OD值中减去红细胞对照管（第7管）的OD值。再减去按待测血清每管实际用量计算出的血清色度OD值（80/800ⅹ该管实际量ⅹ第8管OD值）。即为测定管的校正OD值。然后计算各测定管的溶血率（y值）
 
再计算各管的y/（1-y）值。
（2）在双对数坐标纸上，以y/（1─y）值为横坐标，血清用量为纵坐标，得到一条直线。由于50%溶血（y=0.5）的y/（1─y）值等于1。即可由横坐标等于1的一点，在直线上求得在纵坐标上相应的截距，此即产生50%溶血的待测血清实际用量。
（3）最后，按下列公式计算出每毫升待测血清的总补体活性，以单位/毫升表示之。  

常见问题

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